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DNA甲基化檢測(cè)
一、服務(wù)介紹
DNA甲基化是早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一，真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?/span>5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá)，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。這種DNA修飾方在不改變基因序列前提下實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。脊椎動(dòng)物DNA的甲基化狀態(tài)與生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控密切相關(guān)，比如在腫瘤發(fā)生時(shí)，抑癌基因CpG島以外的CpG序列非甲基化程度增加，CpG島中的CpG則呈高度甲基化狀態(tài)，導(dǎo)致抑癌基因表達(dá)的下降。
二、實(shí)驗(yàn)原理
1、甲基化特異性PCR（MS-PCR）
在亞硫酸氫鹽處理后，即可開展MS-PCR。通常設(shè)計(jì)兩對(duì)引物，一對(duì)MSP引物擴(kuò)增經(jīng)亞硫酸氫鹽處理后的DNA模板，而另一對(duì)擴(kuò)增未甲基化片段。若對(duì)引物能擴(kuò)增出片段，則說明該檢測(cè)位點(diǎn)存在甲基化，若**對(duì)引物能擴(kuò)增出片段，則說明該檢測(cè)位點(diǎn)不存在甲基化。這種方法靈敏度高，適用性廣。
2、亞硫酸鹽甲基化測(cè)序（Bisulfite Genomic Sequencing PCR）
BSP的原理通過對(duì)基因組DNA進(jìn)行重亞硫酸鹽處理，非甲基化的胞嘧啶被脫氨基而轉(zhuǎn)變成尿嘧啶，在隨后的PCR反應(yīng)中尿嘧啶轉(zhuǎn)變成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不能被脫氨基，在反應(yīng)完成時(shí)被保留，我們將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行TA克隆測(cè)序，就可以分析甲基化發(fā)生的具體情況。該方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性高，是甲基化檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。
三、DNA甲基化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)流程：
1.設(shè)計(jì)并合成引物；
2.提取DNA；
3.DNA亞硫酸鹽修飾；
4.PCR擴(kuò)增；
5.MSP法檢測(cè)電泳產(chǎn)物或BSP法對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序；
6.數(shù)據(jù)分析
