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組織切片
免疫組化實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟組織切片是制作組織標(biāo)本比較常用的方法，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察；還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中比較好的組織標(biāo)本制作方法。
組織切片流程：
1、取材
2、固定
3、脫水：30%--50%---70%（每步60分鐘）---85%---95%----- （每步30分鐘）。
4、透明：轉(zhuǎn)入1/2二甲苯＋1/2無水酒精混合液20ml透明1h，純二甲苯20 ml透明1h，再用純二甲苯20ml透明40min，并回收各液。
5、浸蠟：（1）將材料分別放入25%、50%、75%的石蠟-二甲苯溶液中，每級30分鐘。該過程在高于石蠟熔點(diǎn)3℃的溫箱中進(jìn)行；
（2）將材料放入溶解的純蠟中，時間為30分鐘，該過程再重復(fù)兩次。在高于石蠟熔點(diǎn)3℃的溫箱中進(jìn)行。
6、包埋 ：（1）將溶解好的石蠟在加入預(yù)先折好的紙船中，石蠟溶解后應(yīng)過濾后使用，以免含雜質(zhì)影響切片；
（2）材料放入紙船，并擺好在蠟中的位置，如果包埋的組織塊較多，應(yīng)進(jìn)行編號；
（3）將紙船放置在冷水上加速冷卻過程。
7、切片 ：（1）修整：用刀片修成方形或長方形蠟塊；
（2）以少許熱蠟液，將蠟塊底部粘附于小木塊上，以少許石蠟融化在蠟塊邊緣，加強(qiáng)粘附的強(qiáng)度；
（3）木塊粘附于切片機(jī)上，調(diào)整切片機(jī)，使蠟塊切面與切片刀刃平行；
（4）切成連續(xù)的蠟帶，切片刀的銳利度、蠟塊的硬度都會影響切片質(zhì)量，可用熱水或冷水適當(dāng)改變石蠟的硬度，也可 在冰箱中放置一段時間；
（5）分割蠟帶，分開的蠟片放在45℃溫水上，使蠟片展開。
8、粘片與烤片：
（1）可用粘片劑防止蠟片滑脫，但粘附劑通常容易被染色而使切片背景有顏色，影響觀察，實(shí)驗(yàn)表明，載玻片洗的足 夠干凈，一般不會滑片；
（2）用載玻片撈取展開后的蠟片，調(diào)整蠟片的位置使位于載玻片中央，自然干燥
