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流式細(xì)胞分選
實驗原理
流式細(xì)胞分選技術(shù)是利用流式細(xì)胞分選儀，以高能量激光照射高速流動狀態(tài)下被熒光色素染色的單細(xì)胞或微粒，測量其產(chǎn)生的散射光和發(fā)射熒光的強(qiáng)度，從而對細(xì)胞（或微粒）的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學(xué)性狀及功能狀態(tài)等進(jìn)行定性或定量檢測的一種現(xiàn)代細(xì)胞分析技術(shù)，它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強(qiáng)度和波長將發(fā)光顆粒亞群分開并可實現(xiàn)單克隆分選，能將復(fù)雜樣品中的細(xì)胞進(jìn)行鑒定、分類、定量和分離，單次可同時對其中一種到四種特定細(xì)胞進(jìn)行超高速分選純化、高通量單克隆分選或細(xì)胞芯片制備。分選后的細(xì)胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細(xì)胞PCR擴(kuò)增或原位雜交等，可進(jìn)一步進(jìn)行細(xì)胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細(xì)胞之間差異研究。
技術(shù)應(yīng)用
流式細(xì)胞分選可分選得到高純度、高活性的稀有細(xì)胞，通過直接培養(yǎng)、誘導(dǎo)、增殖、分化、活化和移植等進(jìn)行更深一步的細(xì)胞功能和細(xì)胞**探索。如熒光穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選、干細(xì)胞篩選、上皮細(xì)胞篩選、造血干細(xì)胞分選等。
實驗步驟
收集細(xì)胞：若為貼壁細(xì)胞，待細(xì)胞生長達(dá)到80%-90%融合后，棄掉培養(yǎng)液，用2ml D-PBS洗細(xì)胞，加入胰酶消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓后，加入培養(yǎng)基終止消化，收集細(xì)胞懸液至15ml離心管中；若為懸浮細(xì)胞，則吸取細(xì)胞懸液至離心管中。
1000rpm離心5min，棄上清，加入D-PBS懸浮細(xì)胞。
1000rpm離心5min，棄上清。
加入500μl D-PBS懸浮細(xì)胞，分別加入抗體，4℃條件下孵育30min后，用流式分選細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞分選。
注意事項
若分選得到的細(xì)胞需要繼續(xù)培養(yǎng)，則整個操作過程需要無菌。
上機(jī)樣品為單細(xì)胞懸液。
