智啟醫(yī)學(xué)新維度
服務(wù)電話： 180-1784-7121（微信同號）
激光共聚焦
激光共聚焦：聚焦顯微技術(shù)（Confocal microscopy）是通過激光掃描共聚焦顯微鏡來獲取細(xì)胞內(nèi)某個薄層面上的熒光信息, 并結(jié)合計算機(jī)自動控制和信息收集功能，對熒光信號的分布、強(qiáng)度和動態(tài)變化進(jìn)行較好的的分析和整合, 從而得到豐富的細(xì)胞信息。 消除了聚焦平面以外的熒光信號的干擾, 故成像清晰。可以對樣品不同層面進(jìn)行連續(xù)逐層掃描, 再由計算機(jī)將這些圖形重組為三維圖像，圖形清晰度高、層次分明、立體感更強(qiáng)。可對細(xì)胞某個選定結(jié)構(gòu)進(jìn)行長度和體積的測量, 在分析細(xì)胞空間結(jié)構(gòu)和某些物質(zhì)的胞內(nèi)定位方面具有明顯的優(yōu)勢，可同時實現(xiàn)多重指標(biāo)的檢測。，該技術(shù)應(yīng)用范圍已擴(kuò)展到細(xì)胞學(xué)、微生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、遺傳學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、生理和病理學(xué)等學(xué)科，成為現(xiàn)代生物學(xué)微觀研究的重要工具。
激光共聚焦實驗前的步驟
1、做細(xì)胞爬片（爬片的步驟就不詳述了），注意：洗片子的PBS和固定用的4%多聚甲醛要新鮮配制的（一周以內(nèi)的都能用）， 因為PBS和4%多聚甲醛放久了后，都會有自發(fā)熒光。
2、抗體的孵育：預(yù)實驗的時候熒光根據(jù)文獻(xiàn)和經(jīng)驗設(shè)定一、二抗的濃度，一抗4度孵育過夜（時間8～12h）；二抗（熒光抗體）孵育時要避光，孵育好后用PBS充分沖洗；可以將做好的片子直接在板子中孵育，如果從節(jié)約的角度來看，可以用12或24孔板比較好。
3、做好以上步驟后，將板子里放點PBS，保存片子濕潤，不要干片，這樣會影響細(xì)胞形態(tài)。
4、到激光共聚焦觀察室后，再將爬片取出，在干凈的載玻片上滴一滴50%的甘油，然后將爬片取出來倒扣在滴過甘油的載玻片上（即細(xì)胞在2層玻片之間，不要反了哦；還有千萬不要用中性樹膠封片！
5、顯微鏡下觀察即可
