智啟醫(yī)學(xué)新維度
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一、達(dá)為科優(yōu)勢
酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾;
WST-8的細(xì)胞毒性非常低,因此可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到佳測定時(shí)間。
二、原理
CCK-8檢測細(xì)胞增殖(活力):CCK-8(cell-counting kit-8)檢測試劑盒是應(yīng)用WST-8取代MTT被還原,WST-8是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。且WST-8相較XTT和MTS化學(xué)性狀更穩(wěn)定, 因此實(shí)驗(yàn)結(jié)果相對更加穩(wěn)定。此外,WST-8相較MTT、XTT,線性范圍相對寬,靈敏度更高。當(dāng)細(xì)胞增殖得越多越快,則formazan產(chǎn)生量越多,顏色越深;反之,當(dāng)內(nèi)外因造成的細(xì)胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞,顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。應(yīng)用酶標(biāo)儀測定吸光值并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算便可以獲得細(xì)胞增殖(活性)相關(guān)數(shù)據(jù)。
三、服務(wù)流程
1. 制備細(xì)胞懸液:細(xì)胞計(jì)數(shù)
2. 接種到96孔板中,同樣的樣本可做3個(gè)重復(fù)。
3. 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 加入10ul CCK8
5. 培養(yǎng)1-4小時(shí)
6. 測定450nm吸光度