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產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
成年小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng):傳統(tǒng)培養(yǎng)方法體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞經(jīng)長時間傳代培養(yǎng)后往往去分化為成纖維細(xì)胞,導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)量及活性下降.如何避免培養(yǎng)過程中的去分化問題,是模擬體內(nèi)軟骨內(nèi)成骨軟骨發(fā)育過程的關(guān)鍵.
詳情介紹：
成年小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)
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C57小鼠，8-10周，通過頸椎脫位處死，浸入75%乙醇浸泡5分鐘，轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中。
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使用眼科剪和鑷子，使髖關(guān)節(jié)脫臼，保持股骨頭完整。
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用止血qian去除每個股骨頭的軟骨帽，將組織放入含2%雙抗的PBS中。
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用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍，將關(guān)節(jié)軟骨小心移到2ml離心管中。
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用眼科剪dao將軟骨帽剪成約1mm3的碎片，加入3ml預(yù)熱的Collagenase D（1.5mg/ml）。
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放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第yi次消化，時間2h 。
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第yi次消化結(jié)束后，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，40um的細(xì)胞篩過濾后，離心1500rpm，2min。
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沉淀用DMEM完quan培養(yǎng)基重懸，計數(shù)，種植在24孔板中。
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在未消化的組織中加入3ml預(yù)熱的Collagenase D，放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第er次消化，時間2h，然后收集細(xì)胞。
