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產(chǎn)品詳情
簡單介紹:
是一種可被實(shí)驗(yàn)儀器非常方便檢測到的化學(xué)基團(tuán)、蛋白質(zhì)或酶以及編碼它們的基因。reporter可以通過實(shí)驗(yàn)手段非常容易被鑒定與檢測,因此在實(shí)驗(yàn)中廣泛應(yīng)用。
例如,熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)中運(yùn)用的熒光素酶基因,以及qPCR中的熒光報告基團(tuán)。
詳情介紹:
轉(zhuǎn)錄因子的 DNA 結(jié)合域和順式作用元件實(shí)現(xiàn)共價結(jié)合,從而對基因的表達(dá)起抑制或增強(qiáng)的調(diào)控作用。熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)就是檢測轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用的一種檢測方法。
熒光素酶(Luciferase):是能夠催化底物氧化發(fā)光的一類酶的統(tǒng)稱。
熒光素酶的種類很多,其中應(yīng)用較為廣泛的是螢火蟲熒光素酶(Firefly luciferase,F(xiàn)LUC)和海腎熒光素酶(Renilla luciferase,RLUC)
在ATP、Mg2+、O2存在的條件下,蟲熒光素在蟲熒光素酶的催化下氧化發(fā)光,發(fā)光顏色為黃綠色。
(1)在質(zhì)粒中,將靶啟動子(或其他要研究的基因調(diào)控元件)插入到熒光素酶報告基因前方,構(gòu)建成報告基因質(zhì)粒。
(2) 將可以表達(dá)要檢測的轉(zhuǎn)錄因子的質(zhì)粒與報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,如果此轉(zhuǎn)錄因子能夠激活靶啟動子,則熒光素酶基因就會表達(dá),熒光素酶的表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄因子的作用強(qiáng)度成正比。
(3)加入特定的熒光素酶底物,熒光素酶與底物反應(yīng),產(chǎn)生熒光,通過檢測熒光的強(qiáng)度可以測定熒光素酶的活性,從而判斷轉(zhuǎn)錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。