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簡單介紹:
甲基化檢測:生物的遺傳信息主要貯存在 DNA 中,而 DNA 由 AGCT 四種堿基、核糖、磷酸基團等組成。堿基上可以發(fā)生化學修飾,zui常見的形式是胞嘧啶C的第5位碳原子的甲基化,形成 5-甲基胞嘧啶(5mC)。
詳情介紹:
如果采用色譜和串聯質譜聯用,可降低對起始 DNA 量的需求,起始 DNA 50-100ng 即可,還有文獻報道用 5ng DNA 進行檢測[3]。LC-MS/MS 對于不同質量的 DNA 沒有偏好性,比如低質量的 FFPE 樣本,這就像你吃東西的時候,不管你吃的山珍海味還是粗茶淡飯,到肚子里面都差不多。顯而易見的是,這種方法依賴于色譜和串聯質譜儀,還需要專業(yè)的操作人員。當然,你們醫(yī)院或者機構有這樣的設備,LM-MS/MS 其實是很好的方法。
還可以用基 ELISA 的方法快速估計 DNA 甲基化的水平。先將 DNA 結合到反應孔中,洗掉未結合的 DNA;加入 5mC 特異性抗體,然后加入用于檢測的二抗,加入顯色劑,測量吸光值。甲基化的 DNA 越多,OD450nm 的值越高?;?ELISA 的方法優(yōu)缺點很明顯,優(yōu)點是非??焖?,而且操作簡單,缺點是結果不穩(wěn)定,干擾因素比較多,適用于檢測整體 DNA 甲基化非常顯著的情況,比如整體DNA甲基化水平變化了 1.5-2 倍。