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產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱：β-半乳糖苷酶染色

  • 產(chǎn)品型號：
  • 產(chǎn)品廠商：其它品牌
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡單介紹：
β-半乳糖苷酶染色細(xì)胞衰老是細(xì)胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退、逐漸趨向死亡的現(xiàn)象。衰老的細(xì)胞雖然生長發(fā)生不可逆性停滯，不能進(jìn)入S期，但仍具有代謝功能，而且比年輕細(xì)胞的抗凋亡能力強(qiáng)，可以繼續(xù)生存。其特征是細(xì)胞體積變大，呈扁平狀；細(xì)胞核變大，核膜內(nèi)陷，染色質(zhì)聚集、固縮、裂解；胞質(zhì)內(nèi)顆粒增加，有空泡形成；線粒體的數(shù)目及形狀發(fā)生改變；膜流動性降低；溶酶體內(nèi)容物增多，導(dǎo)致溶酶體酶β-半乳糖苷酶活性升高。
詳情介紹：

β-半乳糖苷酶染色

細(xì)胞衰老是細(xì)胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退、逐漸趨向死亡的現(xiàn)象。衰老的細(xì)胞雖然生長發(fā)生不可逆性停滯，不能進(jìn)入S期，但仍具有代謝功能，而且比年輕細(xì)胞的抗凋亡能力強(qiáng)，可以繼續(xù)生存。其特征是細(xì)胞體積變大，呈扁平狀；細(xì)胞核變大，核膜內(nèi)陷，染色質(zhì)聚集、固縮、裂解；胞質(zhì)內(nèi)顆粒增加，有空泡形成；線粒體的數(shù)目及形狀發(fā)生改變；膜流動性降低；溶酶體內(nèi)容物增多，導(dǎo)致溶酶體酶β-半乳糖苷酶活性升高。衰老細(xì)胞所具有的上述特征成為各種細(xì)胞衰老檢測手段的依據(jù)。

(1)細(xì)胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預(yù)先放置滅jun的細(xì)胞片a，每孔加入1x105個細(xì)胞，37℃ 5% CO2

條件下培養(yǎng)過夜，使細(xì)胞在細(xì)胞片上生長。

(2)在超凈工作臺中吸棄6孔培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液a，加入x1PBS，洗滌細(xì)胞1次，隨后加入2%甲

醛/0.2%戊二醛固定液a，室溫條件下固定3~5分鐘。

(3)吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，加入x1PBS，洗滌細(xì)胞3次，每次3分鐘。

(4)吸棄x1PBS，加X-Gal溶液以浸沒細(xì)胞片為宜，37℃孵育4~8小時或過夜，用保鮮膜包被6

孔培養(yǎng)板以防染液蒸發(fā)。

(5)取出細(xì)胞爬片，去離子水。沖洗2次，再次用固定液固定4分鐘，流水輕輕沖洗。

(6)將細(xì)胞爬片按此順序脫水、透明:95%酒精I(xiàn)(2分鐘)→95%酒精Ⅱ°(2分鐘)→100%酒精

| (2分鐘)→100%酒精I(xiàn)(5分鐘)→二甲苯|(2分鐘)→二甲苯Ⅱa(2分鐘)。

(7)中性樹膠封片。

(8)在普通光學(xué)顯微鏡下觀察衰老細(xì)胞形態(tài)。

每張片子鏡下計數(shù)400個細(xì)胞，確定X-Gal染色陽性細(xì)胞(衰老細(xì)胞)在細(xì)胞群體中的所占的百分

比即衰老細(xì)胞率(藍(lán)染細(xì)胞數(shù)/總計細(xì)胞數(shù)x100%).

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