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產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱：流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞ROS水平

  • 產(chǎn)品型號(hào)：
  • 產(chǎn)品廠商：其它品牌
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡(jiǎn)單介紹：
?活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括過(guò)氧化氫（H2O2，Hydrogen peroxide）、羥基自由基（?OH，Hydroxyl radical）、單線態(tài)氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧陰離子(?O2-，Superoxide anion)、過(guò)氧化自由基(ROO? ，Peroxyl radical)、過(guò)氧羥自由基（HOO? ，hydroperoxyl）及其下游產(chǎn)物過(guò)氧化物過(guò)氧亞硝基陰離子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羥化物等，參與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過(guò)程。
詳情介紹：

一、流式細(xì)胞術(shù)是一種基于熒光的檢測(cè)，從懸浮于溶液中的單個(gè)細(xì)胞就能同時(shí)測(cè)定多種特性

二、活性氧(Reactive oxygen species, ROS)： 包括過(guò)氧化氫（H2O2，Hydrogen peroxide）、羥基自由基（?OH，Hydroxyl radical）、單線態(tài)氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧陰離子(?O2-，Superoxide anion)、過(guò)氧化自由基(ROO? ，Peroxyl radical)、過(guò)氧羥自由基（HOO? ，hydroperoxyl）及其下游產(chǎn)物過(guò)氧化物過(guò)氧亞硝基陰離子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羥化物等，參與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過(guò)程。

三、實(shí)驗(yàn)流程

1. 從冰箱取出BBoxiProbe® O06 熒光探針，使其恢復(fù)至室溫，變成液體狀態(tài)后用掌上離心機(jī)離心一下，避免浪費(fèi)。按照 1:1000的比例用無(wú)血清DMEM高糖培養(yǎng)基稀釋 O06 探針；

2. 取根據(jù)分組給藥處理48h過(guò)的六孔板中的細(xì)胞，把舊的培養(yǎng)基用移液器棄掉，用PBS潤(rùn)洗2次，吸凈孔中液體，用0.5毫升的胰酶消化，室溫條件下一分鐘作用。終止消化后將細(xì)胞吹下來(lái)，盡量不要產(chǎn)生氣泡。

3. 細(xì)胞轉(zhuǎn)移到10毫升管中，配平后離心機(jī)在1000rpm條件下運(yùn)行5分鐘，棄上清。

4. 用1毫升 1×PBS重懸細(xì)胞，配平后離心機(jī)1000rpm運(yùn)行5min，棄上清，這是要將離心管中的完全培養(yǎng)基以及胰酶完全洗干凈。

5. 再在離心管中加入2ml稀釋好的 O06 探針中，37℃培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育20分鐘，避光是為了防止光線照射對(duì)探針的效果產(chǎn)生影響。由于細(xì)胞在靜置的過(guò)程中會(huì)沉積到溶液底部，導(dǎo)致細(xì)胞不能夠與探針充分接觸，所以每隔 3-5 min要拿出來(lái)顛倒混勻。20min后用離心機(jī)在1000rpm條件下運(yùn)行5分鐘，保留沉淀。

6. 用不含有血清的細(xì)胞培養(yǎng)基重懸，離心機(jī)1000轉(zhuǎn)離心5min，棄上清；

7. 重復(fù)步驟6三次，這是為了將沒(méi)有進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針洗掉，避免其影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

用400微升無(wú)血清培養(yǎng)基重新將細(xì)胞吹打起來(lái)，轉(zhuǎn)移到流式管中，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組的ROS水平。

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