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蛋白質(zhì)免疫(Western Blot,WB)印跡實(shí)驗(yàn),這是一種廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫學(xué)等領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
一、基本原理
Western Blot 通過(guò)電泳將蛋白質(zhì)分離,然后將分離后的蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相載體(如硝酸纖維素膜或 PVDF 膜)上。接著,利用特異性抗體與目的蛋白結(jié)合,再通過(guò)標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測(cè),以確定目的蛋白的存在、大小和相對(duì)豐度。
二、主要步驟
1. 樣品制備:提取含有目標(biāo)蛋白的組織或細(xì)胞樣品,進(jìn)行裂解、勻漿等處理,制備成蛋白質(zhì)溶液。
2. 電泳分離:將蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行 SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳),根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小進(jìn)行分離。
3. 轉(zhuǎn)膜:將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,常用的轉(zhuǎn)膜方法有濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)。
4. 封閉:用封閉液封閉膜上的非特異性結(jié)合位點(diǎn),以減少背景干擾。
5. 一抗孵育:加入特異性一抗,與目的蛋白結(jié)合。
6. 二抗孵育:加入標(biāo)記的二抗,與一抗結(jié)合,用于檢測(cè)目的蛋白。
7. 檢測(cè):通過(guò)顯色或發(fā)光等方法檢測(cè)目的蛋白的信號(hào)。
三、應(yīng)用領(lǐng)域
1. 蛋白質(zhì)表達(dá)分析:檢測(cè)特定蛋白質(zhì)在不同組織、細(xì)胞或不同處理?xiàng)l件下的表達(dá)水平變化。
2. 蛋白質(zhì)定位研究:確定蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的定位。
3. 蛋白質(zhì)相互作用研究:通過(guò)共免疫沉淀結(jié)合 Western Blot 檢測(cè)蛋白質(zhì)之間的相互作用。
4. 疾病診斷和研究:在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,用于檢測(cè)疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)變化,為疾病的診斷和研究提供依據(jù)。
四、實(shí)驗(yàn)服務(wù)
分子實(shí)驗(yàn)平臺(tái):高效運(yùn)作了qRT-PCR、Western blot、雙向電泳技術(shù)、分子克隆與質(zhì)粒構(gòu)建、流式細(xì)胞儀檢測(cè)、免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定、外泌體抽提及鑒定等實(shí)驗(yàn)。
基因組學(xué)平臺(tái):可以完成甲基化檢測(cè)、基因芯片分析、高通量測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。
蛋白組學(xué)平臺(tái):能實(shí)現(xiàn)LC-MS、ITRAQ、蛋白質(zhì)修飾分析等重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。
病理學(xué)平臺(tái):涉及免疫熒光染色、免疫組織化學(xué)染色、HE染色、特殊染色等實(shí)驗(yàn)。
生物信息學(xué)分析:文本挖掘,芯片表達(dá)譜分析,序列分析,轉(zhuǎn)錄因子靶點(diǎn)預(yù)測(cè),高通量測(cè)序數(shù)據(jù)分析等項(xiàng)目
臨床前CRO服務(wù):主要提供呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學(xué)評(píng)價(jià)服務(wù),包括靶點(diǎn)驗(yàn)證、體內(nèi)外模型的構(gòu)建、藥物篩選、藥物分析、藥效性評(píng)價(jià)、藥代動(dòng)力學(xué)和藥理學(xué)研究以及院內(nèi)制劑研發(fā)等。
項(xiàng)目轉(zhuǎn)化服務(wù):助力客戶進(jìn)行方案設(shè)計(jì)、聯(lián)合課題申報(bào)、藥物項(xiàng)目引進(jìn)和孵化,解決客戶對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)、專業(yè)人才、zhuanli申請(qǐng)和融資的需求;
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