免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一種研究蛋白質(zhì)相互作用的常用實驗技術(shù)。蛋白間相互作用是細(xì)胞各種基本功能的主要完成者，參與幾乎所有的重要生命活動。因此，蛋白-蛋白相互作用研究以及建立相互作用的關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖，具有十分重要的意義，也是目前蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域的熱點。

一、基本原理

利用抗體特異性地結(jié)合目標(biāo)蛋白，在細(xì)胞裂解液中與目標(biāo)蛋白形成免疫復(fù)合物，然后通過Protein A/G 等介質(zhì)將免疫復(fù)合物沉淀下來，進而分析與目標(biāo)蛋白相互作用的其他蛋白質(zhì)。

二、免疫共沉淀實驗優(yōu)勢：

1. 取材可以選擇該目的蛋白所在物種、特定組織、細(xì)胞，因此CoIP能夠反應(yīng)該蛋白在天然組織細(xì)胞狀態(tài)下存在的互作關(guān)系蛋白；
2. 找出整個復(fù)合體中直接/間接互作的多個蛋白，研究復(fù)合體組成；
3. 通過與質(zhì)譜鑒定連用可以初篩到一系列未知蛋白，再通過其他技術(shù)進一步驗證。

三、主要步驟

1. 細(xì)胞裂解：收集細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)牧呀庖毫呀饧?xì)胞，釋放出蛋白質(zhì)。

2. 抗體孵育：加入特異性抗體，與目標(biāo)蛋白結(jié)合形成免疫復(fù)合物。

3. 加入 Protein A/G 介質(zhì)：Protein A/G 可以結(jié)合抗體，從而將免疫復(fù)合物沉淀下來。

4. 洗滌：去除非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，多次洗滌沉淀復(fù)合物。

5. 洗脫：用適當(dāng)?shù)南疵撘簩⒚庖邚?fù)合物從 Protein A/G 介質(zhì)上洗脫下來。

6. 分析：可以通過 Western Blot、質(zhì)譜等方法分析免疫復(fù)合物中的蛋白質(zhì)，確定與目標(biāo)蛋白相互作用的蛋白。

四、實驗注意事項

1. 抗體選擇：選擇特異性高、親和力強的抗體至關(guān)重要。

2. 裂解液：裂解液的成分要合適，既要能充分裂解細(xì)胞釋放蛋白質(zhì)，又不能破壞蛋白質(zhì)之間的相互作用。

3. 對照設(shè)置：設(shè)置正確的對照實驗，如使用正常 IgG 作為陰性對照，以排除非特異性結(jié)合。

4. 洗滌條件：洗滌要充分，但不能過于劇烈以免破壞免疫復(fù)合物。

5. 避免蛋白降解：整個實驗過程中要盡量避免蛋白質(zhì)降解，可以加入蛋白酶抑制劑。

五、達(dá)為科實驗服務(wù)

分子實驗平臺：高效運作了qRT-PCR、Western blot、雙向電泳技術(shù)、分子克隆與質(zhì)粒構(gòu)建、流式細(xì)胞儀檢測、免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實驗、酶聯(lián)免疫吸附測定、外泌體抽提及鑒定等實驗。

基因組學(xué)平臺：可以完成甲基化檢測、基因芯片分析、高通量測序等實驗。

蛋白組學(xué)平臺：能實現(xiàn)LC-MS、ITRAQ、蛋白質(zhì)修飾分析等重點實驗項目。

病理學(xué)平臺：涉及免疫熒光染色、免疫組織化學(xué)染色、HE染色、特殊染色等實驗。

生物信息學(xué)分析：文本挖掘，芯片表達(dá)譜分析，序列分析，轉(zhuǎn)錄因子靶點預(yù)測，高通量測序數(shù)據(jù)分析等項目

臨床前CRO服務(wù)：主要提供呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學(xué)評價服務(wù)，包括靶點驗證、體內(nèi)外模型的構(gòu)建、藥物篩選、藥物分析、藥效性評價、藥代動力學(xué)和藥理學(xué)研究以及院內(nèi)制劑研發(fā)等。

項目轉(zhuǎn)化服務(wù)：助力客戶進行方案設(shè)計、聯(lián)合課題申報、藥物項目引進和孵化，解決客戶對實驗技術(shù)平臺、專業(yè)人才、zhuanli申請和融資的需求；

如果您對我們的服務(wù)內(nèi)容感興趣或有疑問，你可以通過網(wǎng)頁咨詢我們的在線客服，或致電：18815516593，我們將熱情為您服務(wù)。