Co-IP

一、服務(wù)介紹

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究?jī)煞N蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔，已成為研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。

二、免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)原理

當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的很多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)見的相互作用被保留下來。如果以細(xì)胞中某蛋白質(zhì)為抗原，加入相應(yīng)抗體，那么該抗體就能與抗原，以及與該抗原具有相互作用的蛋白質(zhì)之間形成免疫復(fù)合物，一起沉淀下來。經(jīng)過SDS-PAGE電泳，western blot和（或）質(zhì)譜可鑒定出與抗原相互作用的蛋白質(zhì)。

三、免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)流程

1. 用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞兩次，后一次吸干PBS；

2. 按比例加入適量預(yù)冷的RIPA 緩沖液；

3. 用預(yù)冷的細(xì)胞刮子將細(xì)胞從培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶上刮下，把懸液轉(zhuǎn)到1.5EP管中，4°C，緩慢晃動(dòng)（EP管插冰上，置水平搖床上）；

4. 4°C離心后，立即將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中；

5. 準(zhǔn)備Protein A agarose，用PBS 洗兩遍珠子，然后用PBS配制成50%濃度，建議減掉槍尖部分，避免在涉及瓊脂糖珠的操作中破壞瓊脂糖珠；

6. 按比例加入Protein A瓊脂糖珠（50%），4℃搖晃10min（EP管插冰上，置水平搖床上），以去除非特異性雜蛋白，降低背景；

7. 4°C離心后，將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中，去除Protein A珠子；

8.用BCA法測(cè)定蛋白濃度，測(cè)前將總蛋白至少稀釋1：10倍以上，以減少細(xì)胞裂解液中去垢劑的影響（定量，分裝后，可以在-20℃保存一個(gè)月）；

9. 用PBS將總蛋白稀釋到合適濃度；

10. 加入體積的預(yù)先稀釋的一抗；

11. 4°C緩慢搖動(dòng)抗原抗體混合物過夜或室溫2h，激酶或磷酸酯酶活性分析建議用2 h室溫孵育；

12. 加入Protein A瓊脂糖珠來捕捉抗原抗體復(fù)合物，4°C緩慢搖動(dòng)抗原抗體混合物過夜或室溫1h；

13.瞬時(shí)離心5s，收集瓊脂糖珠-抗原抗體復(fù)合物，去上清，用預(yù)冷的洗液（或PBS）洗3遍；

14. 將上樣樣品煮5min，以游離抗原，抗體，珠子，離心，將上清電泳，收集剩余瓊脂糖珠，上清也可以暫時(shí)凍-20℃，留待以后電泳，電泳前應(yīng)再次煮5min變性。

客戶提供：

1、新鮮的樣本材料（組織、細(xì)胞或蛋白溶液）

2、免疫沉淀的抗體（或由公司代購(gòu)）及待測(cè)蛋白的相關(guān)信息

3、用于western blot的一抗

交付內(nèi)容： 

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟、圖片等。

服務(wù)列表

項(xiàng)目	備注	周期
Co-IP	含一個(gè)陽性蛋白和一個(gè)陰性蛋白檢測(cè)	20個(gè)工作日
Western blot	包括蛋白提取，每張膜按8個(gè)樣計(jì)算（其他三個(gè)為marker，陽性對(duì)照，陰性對(duì)照）	5個(gè)工作日

四、達(dá)為科實(shí)驗(yàn)服務(wù)

分子實(shí)驗(yàn)平臺(tái)：高效運(yùn)作了qRT-PCR、Western blot、雙向電泳技術(shù)、分子克隆與質(zhì)粒構(gòu)建、流式細(xì)胞儀檢測(cè)、免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定、外泌體抽提及鑒定等實(shí)驗(yàn)。

基因組學(xué)平臺(tái)：可以完成甲基化檢測(cè)、基因芯片分析、高通量測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。

蛋白組學(xué)平臺(tái)：能實(shí)現(xiàn)LC-MS、ITRAQ、蛋白質(zhì)修飾分析等重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

病理學(xué)平臺(tái)：涉及免疫熒光染色、免疫組織化學(xué)染色、HE染色、特殊染色等實(shí)驗(yàn)。

生物信息學(xué)分析：文本挖掘，芯片表達(dá)譜分析，序列分析，轉(zhuǎn)錄因子靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，高通量測(cè)序數(shù)據(jù)分析等項(xiàng)目

臨床前CRO服務(wù)：主要提供呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學(xué)評(píng)價(jià)服務(wù)，包括靶點(diǎn)驗(yàn)證、體內(nèi)外模型的構(gòu)建、藥物篩選、藥物分析、藥效性評(píng)價(jià)、藥代動(dòng)力學(xué)和藥理學(xué)研究以及院內(nèi)制劑研發(fā)等。

項(xiàng)目轉(zhuǎn)化服務(wù)：助力客戶進(jìn)行方案設(shè)計(jì)、聯(lián)合課題申報(bào)、藥物項(xiàng)目引進(jìn)和孵化，解決客戶對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)、專業(yè)人才、zhuanli申請(qǐng)和融資的需求；

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