智啟醫(yī)學(xué)新維度
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一、基本原理
在活細(xì)胞狀態(tài)下，固定蛋白質(zhì)-DNA 復(fù)合物，通過(guò)超聲等方法將染色質(zhì)隨機(jī)打斷成小片段，然后利用特異性抗體免疫沉淀目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合的 DNA 片段，經(jīng)過(guò)解交聯(lián)和純化后，對(duì)沉淀下來(lái)的 DNA 片段進(jìn)行分析，如 PCR、測(cè)序等，以確定與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用的 DNA 序列。
二、主要步驟
1. 細(xì)胞固定：使用甲醛等試劑固定細(xì)胞，使蛋白質(zhì)與 DNA 交聯(lián)在一起。
2. 細(xì)胞裂解：裂解細(xì)胞，釋放染色質(zhì)。
3. 染色質(zhì)片段化：通過(guò)超聲或酶切等方法將染色質(zhì)隨機(jī)打斷成適當(dāng)大小的片段。
4. 免疫沉淀：加入特異性抗體，與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合，然后利用 Protein A/G 珠子等介質(zhì)沉淀蛋白質(zhì)-DNA 復(fù)合物。
5. 洗滌：去除非特異性結(jié)合的物質(zhì)。
6. 解交聯(lián)：將蛋白質(zhì)與 DNA 之間的交聯(lián)解除。
7. DNA 純化：純化沉淀下來(lái)的 DNA 片段。
8. 分析：可以通過(guò) PCR、芯片、測(cè)序等方法分析與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合的 DNA 序列。
三、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1. 抗體選擇：選擇特異性高、親和力強(qiáng)的抗體非常重要，以確保能夠有效地沉淀目標(biāo)蛋白質(zhì)-DNA 復(fù)合物。
2. 固定條件：固定的時(shí)間和甲醛濃度要適當(dāng)，避免過(guò)度固定或固定不足。
3. 超聲條件：超聲的功率、時(shí)間和次數(shù)要優(yōu)化，以獲得合適大小的染色質(zhì)片段。
4. 對(duì)照設(shè)置：設(shè)置正確的對(duì)照實(shí)驗(yàn)，如使用正常 IgG 作為陰性對(duì)照，未加抗體的樣品作為空白對(duì)照等。
5. 洗滌條件：洗滌要充分，但不能過(guò)于劇烈，以免損失目標(biāo)復(fù)合物。
6. 解交聯(lián)條件：解交聯(lián)的時(shí)間和溫度要控制好，確保完全解交聯(lián)。
7. DNA 純化：選擇合適的 DNA 純化方法，確保純化后的 DNA 質(zhì)量高。
四、達(dá)為科實(shí)驗(yàn)服務(wù)
分子實(shí)驗(yàn)平臺(tái)：高效運(yùn)作了qRT-PCR、Western blot、雙向電泳技術(shù)、分子克隆與質(zhì)粒構(gòu)建、流式細(xì)胞儀檢測(cè)、免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定、外泌體抽提及鑒定等實(shí)驗(yàn)。
基因組學(xué)平臺(tái)：可以完成甲基化檢測(cè)、基因芯片分析、高通量測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。
蛋白組學(xué)平臺(tái)：能實(shí)現(xiàn)LC-MS、ITRAQ、蛋白質(zhì)修飾分析等重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。
病理學(xué)平臺(tái)：涉及免疫熒光染色、免疫組織化學(xué)染色、HE染色、特殊染色等實(shí)驗(yàn)。
生物信息學(xué)分析：文本挖掘，芯片表達(dá)譜分析，序列分析，轉(zhuǎn)錄因子靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，高通量測(cè)序數(shù)據(jù)分析等項(xiàng)目
臨床前CRO服務(wù)：主要提供呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學(xué)評(píng)價(jià)服務(wù)，包括靶點(diǎn)驗(yàn)證、體內(nèi)外模型的構(gòu)建、藥物篩選、藥物分析、藥效性評(píng)價(jià)、藥代動(dòng)力學(xué)和藥理學(xué)研究以及院內(nèi)制劑研發(fā)等。
項(xiàng)目轉(zhuǎn)化服務(wù)：助力客戶進(jìn)行方案設(shè)計(jì)、聯(lián)合課題申報(bào)、藥物項(xiàng)目引進(jìn)和孵化，解決客戶對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)、專業(yè)人才、zhuanli申請(qǐng)和融資的需求；
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