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產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是一種研究蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的技術(shù)。
詳情介紹：
染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是一種研究蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的技術(shù)。
一、基本原理
在活細(xì)胞狀態(tài)下，固定蛋白質(zhì)-DNA 復(fù)合物，通過超聲等方法將染色質(zhì)隨機(jī)打斷成小片段，然后利用特異性抗體免疫沉淀目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合的 DNA 片段，經(jīng)過解交聯(lián)和純化后，對沉淀下來的 DNA 片段進(jìn)行分析，如 PCR、測序等，以確定與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用的 DNA 序列。
二、主要步驟
1. 細(xì)胞固定：使用甲醛等試劑固定細(xì)胞，使蛋白質(zhì)與 DNA 交聯(lián)在一起。
2. 細(xì)胞裂解：裂解細(xì)胞，釋放染色質(zhì)。
3. 染色質(zhì)片段化：通過超聲或酶切等方法將染色質(zhì)隨機(jī)打斷成適當(dāng)大小的片段。
4. 免疫沉淀：加入特異性抗體，與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合，然后利用 Protein A/G 珠子等介質(zhì)沉淀蛋白質(zhì)-DNA 復(fù)合物。
5. 洗滌：去除非特異性結(jié)合的物質(zhì)。
6. 解交聯(lián)：將蛋白質(zhì)與 DNA 之間的交聯(lián)解除。
7. DNA 純化：純化沉淀下來的 DNA 片段。
8. 分析：可以通過 PCR、芯片、測序等方法分析與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合的 DNA 序列。
三、實驗注意事項
1. 抗體選擇：選擇特異性高、親和力強(qiáng)的抗體非常重要，以確保能夠有效地沉淀目標(biāo)蛋白質(zhì)-DNA 復(fù)合物。
2. 固定條件：固定的時間和甲醛濃度要適當(dāng)，避免過度固定或固定不足。
3. 超聲條件：超聲的功率、時間和次數(shù)要優(yōu)化，以獲得合適大小的染色質(zhì)片段。
4. 對照設(shè)置：設(shè)置正確的對照實驗，如使用正常 IgG 作為陰性對照，未加抗體的樣品作為空白對照等。
5. 洗滌條件：洗滌要充分，但不能過于劇烈，以免損失目標(biāo)復(fù)合物。
6. 解交聯(lián)條件：解交聯(lián)的時間和溫度要控制好，確保完全解交聯(lián)。
7. DNA 純化：選擇合適的 DNA 純化方法，確保純化后的 DNA 質(zhì)量高。
一、基本原理
在活細(xì)胞狀態(tài)下，固定蛋白質(zhì)-DNA 復(fù)合物，通過超聲等方法將染色質(zhì)隨機(jī)打斷成小片段，然后利用特異性抗體免疫沉淀目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合的 DNA 片段，經(jīng)過解交聯(lián)和純化后，對沉淀下來的 DNA 片段進(jìn)行分析，如 PCR、測序等，以確定與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用的 DNA 序列。
二、主要步驟
1. 細(xì)胞固定：使用甲醛等試劑固定細(xì)胞，使蛋白質(zhì)與 DNA 交聯(lián)在一起。
2. 細(xì)胞裂解：裂解細(xì)胞，釋放染色質(zhì)。
3. 染色質(zhì)片段化：通過超聲或酶切等方法將染色質(zhì)隨機(jī)打斷成適當(dāng)大小的片段。
4. 免疫沉淀：加入特異性抗體，與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合，然后利用 Protein A/G 珠子等介質(zhì)沉淀蛋白質(zhì)-DNA 復(fù)合物。
5. 洗滌：去除非特異性結(jié)合的物質(zhì)。
6. 解交聯(lián)：將蛋白質(zhì)與 DNA 之間的交聯(lián)解除。
7. DNA 純化：純化沉淀下來的 DNA 片段。
8. 分析：可以通過 PCR、芯片、測序等方法分析與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合的 DNA 序列。
三、實驗注意事項
1. 抗體選擇：選擇特異性高、親和力強(qiáng)的抗體非常重要，以確保能夠有效地沉淀目標(biāo)蛋白質(zhì)-DNA 復(fù)合物。
2. 固定條件：固定的時間和甲醛濃度要適當(dāng)，避免過度固定或固定不足。
3. 超聲條件：超聲的功率、時間和次數(shù)要優(yōu)化，以獲得合適大小的染色質(zhì)片段。
4. 對照設(shè)置：設(shè)置正確的對照實驗，如使用正常 IgG 作為陰性對照，未加抗體的樣品作為空白對照等。
5. 洗滌條件：洗滌要充分，但不能過于劇烈，以免損失目標(biāo)復(fù)合物。
6. 解交聯(lián)條件：解交聯(lián)的時間和溫度要控制好，確保完全解交聯(lián)。
7. DNA 純化：選擇合適的 DNA 純化方法，確保純化后的 DNA 質(zhì)量高。
