1. 茜素紅 S 染色法：

- 原理：茜素紅 S 是一種蒽醌類衍生物，可與鈣鹽以螯合方式形成復(fù)合物。這種復(fù)合物呈現(xiàn)橘紅色，通過觀察橘紅色的沉積情況，可以判斷組織或細(xì)胞中鈣鹽的分布和含量。鈣鹽變化是骨細(xì)胞增殖分化和骨組織成骨潛能的標(biāo)志之一，所以該方法廣泛用于骨細(xì)胞或組織病理生理的研究。

- 操作步驟：

1. 用 PBS 清洗細(xì)胞樣本，去除雜質(zhì)。

2. 使用 10%中性福爾馬林或乙醇固定 10 - 30 分鐘，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)固定。

3. 吸去固定液，再次用 PBS 清洗細(xì)胞樣本兩次。

4. 滴加茜素紅 S 染色液，覆蓋樣本，染色 1 - 5 分鐘（染色時(shí)間根據(jù)鈣鹽的含量確定）。

5. 吸去染色液，用 PBS 洗滌兩次，洗去未結(jié)合的染料。

6. 在顯微鏡下觀察，鈣沉積陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)桔紅色。

2. Dahl-McGec-Russell 茜素紅 S 法：

- 原理：與茜素紅 S 染色法的原理相似，也是利用茜素紅 S 與鈣鹽的螯合反應(yīng)。

- 操作步驟：

1. 石蠟組織切片，常規(guī)脫蠟至水。

2. 用茜素紅 S 染色液染色 5 分鐘。

3. 蒸餾水速洗 2 次。

4. 用亮綠染色液染色 30 秒（亮綠可作為對(duì)比染色，使背景呈現(xiàn)淡綠色，以便更好地觀察鈣質(zhì)的紅色染色）。

5. 乙酸液速洗 2 次。

6. 無(wú)水乙醇快速脫水。

7. 二甲苯透明，中性樹膠封固。

3. Fluo-4 AM 鈣離子熒光探針法：

- 原理：Fluo-4 AM 是一種可滲透細(xì)胞的熒光鈣指示劑，本身無(wú)熒光，進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)酯酶裂解以釋放出 Fluo-4。Fluo-4 與鈣結(jié)合后，熒光強(qiáng)度會(huì)顯著增加，通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)等設(shè)備，可以檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子的水平和分布情況。

- 操作步驟：

1. 準(zhǔn)備所需試劑，包括 2 mM 的 Fluo-4, AM（DMSO）試劑溶液、Pluronic F127、Hanks balanced salt solution（HBSS）、HEPES buffer saline 等。

2. 向 Fluo-4, AM/DMSO 溶液中加入 Pluronic F127，防止 Fluo-4, AM 在 HBSS 緩沖液中聚合，并幫助其進(jìn)入細(xì)胞。

3. 用 HBSS 緩沖液稀釋 Fluo-4, AM 溶液，制備出 4 μM 的 Fluo-4, AM 溶液。

4. 將制備好的溶液加入細(xì)胞中，在 37℃條件下培養(yǎng)約 20 分鐘。

5. 加入 5 倍體積且含有 1%胎牛血清的 HBSS 緩沖液后，繼續(xù)培養(yǎng)約 40 分鐘。

6. 用 HEPES buffer saline 洗滌細(xì)胞 3 次后，再用 HEPES buffer saline 使細(xì)胞重懸浮，制備成合適濃度的細(xì)胞溶液。

7. 在熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀下進(jìn)行檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)一般為 494nm，發(fā)射波長(zhǎng)為 516nm。

達(dá)為科實(shí)驗(yàn)服務(wù)

分子實(shí)驗(yàn)平臺(tái)：高效運(yùn)作了qRT-PCR、Western blot、雙向電泳技術(shù)、分子克隆與質(zhì)粒構(gòu)建、流式細(xì)胞儀檢測(cè)、免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定、外泌體抽提及鑒定等實(shí)驗(yàn)。

基因組學(xué)平臺(tái)：可以完成甲基化檢測(cè)、基因芯片分析、高通量測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。

蛋白組學(xué)平臺(tái)：能實(shí)現(xiàn)LC-MS、ITRAQ、蛋白質(zhì)修飾分析等重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

病理學(xué)平臺(tái)：涉及免疫熒光染色、免疫組織化學(xué)染色、HE染色、特殊染色等實(shí)驗(yàn)。

生物信息學(xué)分析：文本挖掘，芯片表達(dá)譜分析，序列分析，轉(zhuǎn)錄因子靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，高通量測(cè)序數(shù)據(jù)分析等項(xiàng)目

臨床前CRO服務(wù)：主要提供呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學(xué)評(píng)價(jià)服務(wù)，包括靶點(diǎn)驗(yàn)證、體內(nèi)外模型的構(gòu)建、藥物篩選、藥物分析、藥效性評(píng)價(jià)、藥代動(dòng)力學(xué)和藥理學(xué)研究以及院內(nèi)制劑研發(fā)等。

項(xiàng)目轉(zhuǎn)化服務(wù)：助力客戶進(jìn)行方案設(shè)計(jì)、聯(lián)合課題申報(bào)、藥物項(xiàng)目引進(jìn)和孵化，解決客戶對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)、專業(yè)人才、zhuanli申請(qǐng)和融資的需求；

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