TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）染色法是一種用于檢測組織中活性細(xì)胞的染色方法。

一、染色原理

TTC 是一種無色的氧化還原指示劑，在活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶作用下被還原成紅色的甲臜（Formazan）產(chǎn)物。而死細(xì)胞由于缺乏脫氫酶活性，不能將 TTC 還原，因此不會被染色。

二、應(yīng)用領(lǐng)域

1. 腦缺血研究：

- 在腦缺血動物模型中，通過 TTC 染色可以清晰地顯示出缺血區(qū)域和正常組織的界限。缺血區(qū)域的腦組織由于缺乏血液供應(yīng)，細(xì)胞代謝受到影響，脫氫酶活性降低，不能將 TTC 還原，呈現(xiàn)白色；而正常組織中的細(xì)胞具有活性，能將 TTC 還原成紅色。

- 用于評估腦缺血損傷的程度和范圍，為研究腦缺血的病理生理機(jī)制和**方法提供重要依據(jù)。

2. 心肌梗死研究：

- 在心肌梗死動物模型中，TTC 染色可以區(qū)分梗死區(qū)域和正常心肌組織。梗死區(qū)域的心肌細(xì)胞由于缺血缺氧而死亡，不能將 TTC 還原，呈現(xiàn)白色；正常心肌組織中的細(xì)胞具有活性，能將 TTC 還原成紅色。

- 幫助研究心肌梗死的病理生理過程，評估**方法對心肌梗死的療效。

3. 其他組織研究：

- 也可用于其他組織如肝臟、腎臟等的活性檢測，判斷組織的損傷程度和存活情況。

三、新鮮組織切片制備及染色實(shí)驗(yàn)步驟

1、取材：動物麻醉后立即取新鮮組織(如腦、心臟) ，不經(jīng)固定液固定，將組織直接放入-200速凍20-30min，如果不急用,可以暫時放置-80°C凍存。
2、組織塊切片：將凍好的組織稍解凍，用萊卡刀片手動切片，厚度2-3mm為宜，切面整齊。
3、TTC染色：將切片放入提前預(yù)熱好的的TTC孵育液中，放入37C水浴鍋中避光孵育15-30min，間隔5-8min輕輕搖動組織，使其均勻接觸到染色液,并觀察染色結(jié)果。
4、拍照：組織成色后，加入固定液終止反應(yīng)，并避光保存組織， 照相機(jī)拍照。

四、TTC染色判讀：
組織正常區(qū)呈紅色，梗死區(qū)呈蒼白色。

五、注意事項(xiàng)：
1、標(biāo)本越新鮮越好，勿固定，刀片宜薄而鋒利， 在冰箱中速東的時間以能順利切片為宜，保持切片平整。
2、染色后的標(biāo)本浸存于國定液中避光保存，染色結(jié)果能保存數(shù)月 ，在陽光下易褪色；
3、TTC染色波避光4°C可保存一個月，使用前先復(fù)常溫。

六、優(yōu)缺點(diǎn)

1. 優(yōu)點(diǎn)：

- 操作簡單：染色步驟相對簡單，不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備。

- 特異性高：能夠特異性地檢測組織中的活性細(xì)胞，與死細(xì)胞區(qū)分明顯。

- 直觀性強(qiáng)：染色結(jié)果直觀，通過顏色的差異可以清晰地看到活性細(xì)胞和死細(xì)胞的分布。

2. 缺點(diǎn)：

- 只能檢測細(xì)胞活性，不能提供關(guān)于細(xì)胞功能的詳細(xì)信息。

- 對于某些組織，如含有大量色素或脂肪的組織，染色效果可能不佳。

- TTC 溶液的穩(wěn)定性較差，需要現(xiàn)配現(xiàn)用，且染色過程中需要嚴(yán)格控制溫度和時間，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

七、達(dá)為科實(shí)驗(yàn)服務(wù)

分子實(shí)驗(yàn)平臺：高效運(yùn)作了qRT-PCR、Western blot、雙向電泳技術(shù)、分子克隆與質(zhì)粒構(gòu)建、流式細(xì)胞儀檢測、免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附測定、外泌體抽提及鑒定等實(shí)驗(yàn)。

基因組學(xué)平臺：可以完成甲基化檢測、基因芯片分析、高通量測序等實(shí)驗(yàn)。

蛋白組學(xué)平臺：能實(shí)現(xiàn)LC-MS、ITRAQ、蛋白質(zhì)修飾分析等重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

病理學(xué)平臺：涉及免疫熒光染色、免疫組織化學(xué)染色、HE染色、特殊染色等實(shí)驗(yàn)。

生物信息學(xué)分析：文本挖掘，芯片表達(dá)譜分析，序列分析，轉(zhuǎn)錄因子靶點(diǎn)預(yù)測，高通量測序數(shù)據(jù)分析等項(xiàng)目

臨床前CRO服務(wù)：主要提供呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學(xué)評價服務(wù)，包括靶點(diǎn)驗(yàn)證、體內(nèi)外模型的構(gòu)建、藥物篩選、藥物分析、藥效性評價、藥代動力學(xué)和藥理學(xué)研究以及院內(nèi)制劑研發(fā)等。

項(xiàng)目轉(zhuǎn)化服務(wù)：助力客戶進(jìn)行方案設(shè)計(jì)、聯(lián)合課題申報、藥物項(xiàng)目引進(jìn)和孵化，解決客戶對實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺、專業(yè)人才、zhuanli申請和融資的需求；

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