酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是一種常用的免疫分析技術(shù)，可用于檢測(cè)抗原或抗體。以下是 ELISA 的具體步驟：
 
一、準(zhǔn)備工作
 
1. 試劑準(zhǔn)備
 
- 包被抗體或抗原：根據(jù)檢測(cè)目的選擇合適的抗體或抗原進(jìn)行包被。
- 酶標(biāo)抗體或抗原：選擇與包被抗體或抗原特異性結(jié)合的酶標(biāo)抗體或抗原。
- 底物溶液：選擇合適的底物，在酶的作用下產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)。
- 洗滌液：用于洗滌微孔板，去除未結(jié)合的物質(zhì)。
- 封閉液：用于封閉微孔板，減少非特異性結(jié)合。
- 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品：準(zhǔn)備已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測(cè)的樣品。
2. 器材準(zhǔn)備
 
- 酶標(biāo)儀：用于檢測(cè)微孔板中的信號(hào)。
- 微孔板：通常為 96 孔或 384 孔板。
- 移液器：用于準(zhǔn)確移取液體。
- 恒溫箱：用于孵育微孔板。
 
二、實(shí)驗(yàn)步驟
 
1. 包被
 
- 將包被抗體或抗原用適當(dāng)?shù)木彌_液稀釋至一定濃度。
- 取適量稀釋后的包被抗體或抗原加入微孔板中，每孔通常加入 100μL。
- 將微孔板放入恒溫箱中，在一定溫度下孵育一定時(shí)間，通常為 37℃孵育 1-2 小時(shí)或 4℃過(guò)夜。
2. 封閉
 
- 取出包被后的微孔板，棄去孔內(nèi)液體。
- 用洗滌液洗滌微孔板 3-5 次，每次洗滌后拍干。
- 加入封閉液，每孔通常加入 200μL。
- 將微孔板放入恒溫箱中，在一定溫度下孵育一定時(shí)間，通常為 37℃孵育 1-2 小時(shí)。
3. 加樣
 
- 取出封閉后的微孔板，棄去孔內(nèi)液體。
- 用洗滌液洗滌微孔板 3-5 次，每次洗滌后拍干。
- 加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，每孔通常加入 100μL。同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照孔，只加入緩沖液。
- 將微孔板放入恒溫箱中，在一定溫度下孵育一定時(shí)間，通常為 37℃孵育 1-2 小時(shí)。
4. 加酶標(biāo)抗體或抗原
 
- 取出加樣后的微孔板，棄去孔內(nèi)液體。
- 用洗滌液洗滌微孔板 3-5 次，每次洗滌后拍干。
- 加入酶標(biāo)抗體或抗原，每孔通常加入 100μL。
- 將微孔板放入恒溫箱中，在一定溫度下孵育一定時(shí)間，通常為 37℃孵育 1-2 小時(shí)。
5. 顯色
 
- 取出加酶標(biāo)抗體或抗原后的微孔板，棄去孔內(nèi)液體。
- 用洗滌液洗滌微孔板 3-5 次，每次洗滌后拍干。
- 加入底物溶液，每孔通常加入 100μL。
- 將微孔板放入恒溫箱中，在一定溫度下孵育一定時(shí)間，使底物在酶的作用下產(chǎn)生顏色變化。通常為 37℃孵育 15-30 分鐘。
6. 終止反應(yīng)
 
- 當(dāng)顯色達(dá)到適當(dāng)程度時(shí)，加入終止液，每孔通常加入 50μL。終止液通常為硫酸或氫氧化鈉等強(qiáng)酸或強(qiáng)堿溶液，可使酶促反應(yīng)停止。
7. 檢測(cè)
 
- 使用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下測(cè)定微孔板中各孔的吸光度值。吸光度值與樣品中抗原或抗體的濃度成正比。
8. 結(jié)果分析
 
- 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
- 通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中抗原或抗體的濃度。
 
三、注意事項(xiàng)
 
1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間，確保實(shí)驗(yàn)條件的一致性。
2. 洗滌步驟要充分，以去除未結(jié)合的物質(zhì)，減少非特異性結(jié)合。
3. 加樣時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 底物溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，避免長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致失效。
5. 不同廠家的試劑和儀器可能存在差異，應(yīng)按照說(shuō)明書進(jìn)行操作。

6. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意**，避免接觸有毒有害物質(zhì)。

達(dá)為科實(shí)驗(yàn)服務(wù)

分子實(shí)驗(yàn)平臺(tái)：高效運(yùn)作了qRT-PCR、Western blot、雙向電泳技術(shù)、分子克隆與質(zhì)粒構(gòu)建、流式細(xì)胞儀檢測(cè)、免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定、外泌體抽提及鑒定等實(shí)驗(yàn)。

基因組學(xué)平臺(tái)：可以完成甲基化檢測(cè)、基因芯片分析、高通量測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。

蛋白組學(xué)平臺(tái)：能實(shí)現(xiàn)LC-MS、ITRAQ、蛋白質(zhì)修飾分析等重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

病理學(xué)平臺(tái)：涉及免疫熒光染色、免疫組織化學(xué)染色、HE染色、特殊染色等實(shí)驗(yàn)。

生物信息學(xué)分析：文本挖掘，芯片表達(dá)譜分析，序列分析，轉(zhuǎn)錄因子靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，高通量測(cè)序數(shù)據(jù)分析等項(xiàng)目

臨床前CRO服務(wù)：主要提供呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學(xué)評(píng)價(jià)服務(wù)，包括靶點(diǎn)驗(yàn)證、體內(nèi)外模型的構(gòu)建、藥物篩選、藥物分析、藥效性評(píng)價(jià)、藥代動(dòng)力學(xué)和藥理學(xué)研究以及院內(nèi)制劑研發(fā)等。

項(xiàng)目轉(zhuǎn)化服務(wù)：助力客戶進(jìn)行方案設(shè)計(jì)、聯(lián)合課題申報(bào)、藥物項(xiàng)目引進(jìn)和孵化，解決客戶對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)、專業(yè)人才、zhuanli申請(qǐng)和融資的需求；

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