實(shí)驗(yàn)原理

油紅O是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑，較易與甘油三脂結(jié)合呈小脂滴狀，與磷脂結(jié)合力稍差。

染色原理：主要通過物理上的溶液作用或吸附作用，借溶液作用使脂肪染色。染料在冰凍切片內(nèi)脂質(zhì)的溶解度較在原溶劑中的溶解度更大，所以在染色時(shí)染料就從有機(jī)溶劑轉(zhuǎn)移入脂質(zhì)而使脂肪染色。

油紅O染色方法可用于檢測(cè)組織或細(xì)胞中脂肪油滴的存在和數(shù)量，尤其適用于脂質(zhì)代謝疾病的研究。

實(shí)驗(yàn)指南

樣本準(zhǔn)備：選擇細(xì)胞或組織樣本。確保樣本是新鮮的，保存在冰箱或液氮中。

樣本固定：用4％的多聚甲醛或其他合適的固定行固定樣本，保證固定劑濃度充足并確保完全固定。

化學(xué)處理：將固定的標(biāo)本進(jìn)行化學(xué)處理，以去除其內(nèi)部的脂質(zhì)和其他物質(zhì)。常用方法是將樣本用80％的乙醇浸泡。

染色：在油紅O染色液中將標(biāo)本浸泡，時(shí)間可以根據(jù)需要自行決定。將標(biāo)本移入去離子水或其他適合的緩沖液中沖洗，使其達(dá)到理想的染色效果。

顯微鏡檢查：將標(biāo)本放在顯微鏡下檢查。您應(yīng)該能夠看到樣本中的脂肪油滴，它們應(yīng)該呈現(xiàn)出紅色。

油紅O染色應(yīng)用

1. 顯示組織內(nèi)的脂肪。

2. 動(dòng)脈粥樣硬化（AS）動(dòng)物模型評(píng)價(jià)：AS模型主動(dòng)脈整體油紅O染色評(píng)價(jià)，油紅O染色不僅可以有效直觀地反應(yīng)整根主動(dòng)脈的AS病變程度,而且可以評(píng)價(jià)血管局部不同部位AS斑塊的病變情況。

3. 脊髓損傷動(dòng)物模型評(píng)價(jià)：油紅O染色能夠較明顯的區(qū)分白質(zhì)及灰質(zhì)，在一定程度上反映了白質(zhì)的完整程度。斷端壞死灶內(nèi)油紅0染色隨脊髓損傷時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸明顯，能夠反映脂質(zhì)在脊髓損傷過程中起著重要作用。

油紅O染色操作：

① 冰凍切片厚度6～10μm，不固定或10%福爾馬林固定10min后水洗。

② 切片入蒸餾水中稍沖洗3道；切片入60%的乙醇內(nèi)浸洗20～30s。

③ 切片入油紅O染色液中（油紅O儲(chǔ)備液與雙蒸水為3：2混合后，裝入潔凈EP管靜置10min），加蓋密閉染色10～15min，該過程注意避光。

④ 分色：入60%的乙醇內(nèi)稍洗以便去除染液。入蒸餾水中清洗3次。

⑤ Mayer蘇木素染色液復(fù)染核1～2min。

⑥ 1%的鹽酸溶液稍微分化一下。

⑦ 自來水漂洗10min或稀碳酸鋰溶液中促藍(lán)。

⑧ 將切片放于60℃烘箱中進(jìn)行干燥。

⑨ 甘油明膠或阿拉伯糖膠封固。

⑩ 采圖。（染色結(jié)果不能長(zhǎng)期保存，應(yīng)盡快觀察及照相）

針式濾膜過濾器油紅O染色法

① 常規(guī)冷凍切片將高脂小鼠肝臟樣本切片6～8μm厚，貼于載玻片。

② 固定：置于10％中性福爾馬林固定3min，雙蒸水清洗。

③ 取油紅O儲(chǔ)備液與雙蒸水為1：1混合，裝入潔凈EP管內(nèi)備用。

④ 將切片從水中取出瀝水后平鋪于濕盒內(nèi)，注意不要干片。

⑤ 用注射器吸取配制好的油紅O染液，由針式濾膜過濾器(0．22斗m)上端接口處注入，過濾后的染液直接經(jīng)過濾器下端均勻滴染在組織處，約30s后放入雙蒸水中清洗1次。

⑥ 蘇木精復(fù)染1min，1％鹽酸乙醇分化，流水返藍(lán)3min；

⑦ 甘油明膠封固。

注意事項(xiàng)

① 石蠟切片不能用于油紅O染色，原因在于石蠟包埋過程中需要脫水，脫水過程中需要乙醇-二甲苯和石蠟，二甲苯是有機(jī)溶劑，會(huì)把中性脂肪溶解。

② 冰凍切片準(zhǔn)備時(shí)，包埋的降溫過程建議選擇干冰，原因在于若選擇液氮降溫過程較強(qiáng)烈，可能導(dǎo)致組織內(nèi)部炸裂，而干冰降溫的過程比較緩和，染出來的片子比較好看。

③ 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)建議設(shè)計(jì)陰性對(duì)照和陽性對(duì)照，如陽性對(duì)照可以用脂質(zhì)豐富的肝臟組織等，陰性對(duì)照可以根據(jù)文獻(xiàn)來選擇無脂肪沉積的組織等等。