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PI 染色即碘化丙啶染色,是一種常用的細(xì)胞生物學(xué)染色方法。
一、原理
碘化丙啶(PI)是一種核酸染料,不能透過完整的細(xì)胞膜,但在細(xì)胞凋亡晚期和壞死細(xì)胞中,細(xì)胞膜的完整性被破壞,PI 能夠透過細(xì)胞膜與細(xì)胞內(nèi)的核酸(DNA)結(jié)合,在488 nm的激發(fā)光下發(fā)出紅色熒光。可用于流式細(xì)胞儀染色凋亡細(xì)胞和細(xì)胞核。因?yàn)樗蝗旧珘乃兰?xì)胞,所以也可用于區(qū)分凋亡和壞死細(xì)胞死亡??膳c標(biāo)記有異硫氰酸熒光素的常見綠色熒光探針一起使用。
二、應(yīng)用領(lǐng)域
1. 細(xì)胞凋亡檢測:通過檢測 PI 陽性細(xì)胞的比例來判斷細(xì)胞凋亡的程度。
2. 細(xì)胞周期分析:與其他熒光染料結(jié)合使用,可區(qū)分處于不同細(xì)胞周期階段的細(xì)胞。
三、操作步驟
1. 樣本處理:收集細(xì)胞,進(jìn)行固定等處理。
2. 染色:加入 PI 染液,在特定條件下孵育。
3. 檢測:使用流式細(xì)胞儀等設(shè)備檢測熒光信號。
四、注意事項(xiàng)
1. 染色過程中要注意避光操作,以防止熒光淬滅。
2. 染液的濃度和染色時(shí)間需根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化。
3. 操作過程中要避免染液接觸皮膚和黏膜,以免引起傷害。
碘化丙啶(PI染色)的應(yīng)用:
碘化丙啶是一種不可滲透膜的DNA嵌入劑。在488 nm處有紅色熒光。可用于流式細(xì)胞儀染色凋亡細(xì)胞和細(xì)胞核。因?yàn)樗蝗旧珘乃兰?xì)胞,所以也可用于區(qū)分凋亡和壞死細(xì)胞死亡。可與標(biāo)記有異硫氰酸熒光素的常見綠色熒光探針一起使用。
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