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移植性大鼠惡性垂體腺瘤模型
【操作步驟】惡性大鼠垂體腺瘤細胞株(mGH3)用F12完全培養(yǎng)基(F12培養(yǎng)基＋15％馬血清＋2.5％胎牛血清＋青霉素100U/ml＋鏈霉素100U/ml)，37℃，5％CO2維持。取對數(shù)生長期的mGH3細胞，經(jīng)消化，磷酸鹽緩沖液離心洗滌2次，制成細胞懸液。實驗動物為雌性Wistar-Furth大鼠，體重200～250g，按50mg/kg體重腹腔內注射麻醉，固定于大鼠腦立體定向架，碘伏消毒，正中切開頭皮，剝離骨膜，鉆顱按坐標靶向定位(冠狀縫后1mm，中線旁1.5mm，硬膜下4.5mm)，將肝素化的導管插入腦室，接種細胞量為1×1000000/ml，注射時間為10～15min，注射完畢繼續(xù)留針5min后緩慢退出，骨蠟封閉導管開口及骨窗，縫合頭皮。大鼠腦內接種mGH3細胞后分籠飼養(yǎng)，觀察生長狀態(tài)，每隔1周隨機抽取3只大鼠，麻醉后心臟穿刺抽血，立即離心分離血清，－70℃保存，采用放射免疫分析(RIA)整批檢測大鼠生長**(rGH)。完整剝離腦組織，3mm層厚冠狀面切片，肉眼觀察腫瘤生長情況，再作病理切片，HE染色鏡下觀察。
【結果分析】大鼠腦室內接種1×1000000個mGH3細胞，3周內無明顯改變；3周后出現(xiàn)肢端肥大癥，包括軟組織水腫、四肢末端粗大、毛發(fā)增多、結膜水腫等改變；5周后大鼠出現(xiàn)厭食、消瘦、惡病質改變；6周左右出現(xiàn)死亡，平均生存(44.2±5.6)d。第4周時可見腫瘤生長于一側腦室，已向第3腦室和周圍腦組織浸潤性生長。第6周時見腫瘤充滿腦室，并向周圍腦組織浸潤生長，中線移位，壓迫對側。死亡原因主要為占位效應引起的顱內高壓，但死亡時腫瘤體積較腦膠質瘤小，可能循環(huán)中高生長**水平也是引起死亡的原因之一。病理切片鏡下見腫瘤細胞圓形，大小一致，核大，核染色質凝聚，核仁明顯，核分裂像多見，5～8個/10HP，胞漿豐富，粉紅色；間質內血管豐富，有血竇；細胞具有垂體腺瘤的病理學特征，但異型性更明顯。監(jiān)測循環(huán)中生長**的水平，接種后1～2周，未見rGH水平明顯上升，從第3周起，rGH水平開始上升，以后上升趨勢加快，在死亡前rGH水平達到*高。
由于垂體腺瘤生理和解剖位置的特殊性，建立一種既符合臨床特點又達到實驗要求的垂體腺瘤模型比較困難，通過雌**可誘發(fā)垂體腺瘤，但有較大的隨機性，誘發(fā)瘤種類不一，性質不穩(wěn)定。采用轉基因的方法可以建立穩(wěn)定的垂體腺瘤動物模型。采用細胞移植的方法建立的大鼠惡性垂體腺瘤模型是一種較為理想的動物模型。
來源：《常見人類疾病動物模型的制備方法》 作者：秦川
