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**內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞原代分離研討
2024年5月29日，周三，公司組織，由實(shí)驗(yàn)室主管劉博主導(dǎo)，實(shí)驗(yàn)室全體成員參與，對(duì)**內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞原代分離的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，進(jìn)行了培訓(xùn)與交流。本次會(huì)議，主要針對(duì)**內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞原代分離，就以下內(nèi)容展開了交流：
培訓(xùn)內(nèi)容包含：分離、培養(yǎng)、鑒定、凍存及復(fù)蘇幾個(gè)方面。其中分離步驟較為關(guān)鍵。以下是分離步驟：
（1）**內(nèi)膜置于含無菌DHanks液的100ml三角燒瓶,立即送實(shí)驗(yàn)室。
（2）洗滌2次,用眼科剪將組織剪成1~2mm3的碎塊,400xg離心10min。
（3）加入0.25%胰酶(Trypsin,Sigma),37℃消化30分鐘,輕輕吹打。
（4）細(xì)胞懸液依次通過孔徑為105及88um尼龍網(wǎng),基質(zhì)細(xì)胞通過網(wǎng)眼,而上皮細(xì)胞留在網(wǎng)上。
（5）取基質(zhì)細(xì)胞洗滌2次（DMEM/F(1:1)(GIBCO)）,將細(xì)胞懸浮在2ml的培養(yǎng)液中小心鋪在含有10ml培養(yǎng)液的離心管液面上,密封管口,在37℃(垂直)、置5%C02,培養(yǎng)箱中30分鐘,沉淀后吸出上層8ml,緩慢移至另一離心管中,400xg離心10分鐘,收集細(xì)胞,細(xì)胞再懸浮在2ml培養(yǎng)液中,重復(fù)上述步驟,然后,將細(xì)胞（5）通過37um的尼龍網(wǎng)，用0.04%的臺(tái)盼藍(lán)計(jì)算活細(xì)胞數(shù)。
（6）將細(xì)胞接種到塑料瓶或培養(yǎng)皿中(NUNC),37℃、5%C0培養(yǎng)30~40分鐘,基質(zhì)細(xì)胞迅速貼壁,而上皮細(xì)胞則懸浮在培養(yǎng)液中,重復(fù)一次,即可得到高純度的上皮細(xì)胞,細(xì)胞經(jīng)離心、洗滌，用0.04%臺(tái)盼藍(lán)計(jì)算活細(xì)胞數(shù)。
本次會(huì)議，從分離、培養(yǎng)、鑒定、凍存及復(fù)蘇幾個(gè)方面，提升公司對(duì)**內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞原代分離的重要知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)知，掌握課題研究中所涉及到實(shí)驗(yàn)方法。
