雜交瘤細(xì)胞篩選

雜交瘤細(xì)胞在融合后2周左右即可篩選，即把分泌所需抗體的雜交瘤孔從眾多的孔中選出來，通常也稱為抗體檢測?？贵w檢測的方法很多，通常根據(jù)所研究的抗原和 實驗室的條件而定。但作為雜交瘤篩選的抗體檢測方法具有快速、準(zhǔn)備、簡便，便于一次處理大量樣品等特點。因為往往有幾百個樣品需要在短短幾個小時就報 告結(jié)果，以便決定雜交瘤細(xì)胞的取舍。所以選用抗體檢測方法的原則是快速、敏感、特異、可靠、花費小和節(jié)省人力。一般說來，在融合之前就建立好抗體檢測 方法，并克服可能存在的問題。另一個重要問題是抗體檢測方法所需要的“動力學(xué)范圍”，即檢出背景以上的強與弱信號之比，依所用的檢測抗原是否純凈而 定。如雜交瘤抗體是針對純化的蛋白質(zhì)抗原的，的抗原參與反應(yīng)，一個陽性/陰性判別系統(tǒng)就夠了。另一方面，如果雜交瘤抗體是針對細(xì)胞表面微量的蛋白 抗原，檢測系統(tǒng)可能需要能測出微弱信號，則動力學(xué)范圍至少應(yīng)為10：1，好為100：1。另外，檢測方法的選擇還受所需雜交瘤抗體的類型和預(yù)定的用途的 影響。結(jié)合補體的抗體可以用基于細(xì)胞毒性反應(yīng)的檢測方法來選出。如需結(jié)合A蛋白的雜交瘤抗體，就要用結(jié)合蛋白A的檢測方法。

雜交瘤細(xì)胞的克隆化

從原始孔中得到的陽性雜交瘤細(xì)胞，可能來源于二個或多個雜交瘤細(xì)胞，因此它們所分泌的抗體是不同質(zhì)的。為了得到同質(zhì)的單克隆抗體，對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化。另一方面，雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)的初期是不穩(wěn)定的，有的細(xì)胞丟失部分染色體，可能喪失產(chǎn)生抗體的能力。為了除去這部分已不再分泌抗體的細(xì)胞，得到分泌抗體穩(wěn)定的單克隆雜交瘤細(xì)胞系（又稱亞克隆），也需要克隆化。另外，長期液氮凍存的雜交瘤細(xì)胞，復(fù)蘇后其分泌抗體的功能仍有可能丟失，因此也應(yīng)作克隆化，以檢測抗體分泌情況。通常在得到針對預(yù)定抗原的雜交瘤以后需連續(xù)進(jìn)行2-3次克隆化，有時還需進(jìn)行多次。所謂克隆化是指使單個細(xì)胞無性繁殖而獲得該細(xì)胞團(tuán) 體的整個培養(yǎng)過程。克隆化的方法很多，如有限稀釋法、軟瓊脂法、單細(xì)胞顯微操作法、單克隆細(xì)胞集團(tuán)顯微操作法和熒光激活細(xì)胞分類儀（FACS）。

雜交瘤細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇

（1）雜交瘤細(xì)胞的凍存。在建立雜交瘤細(xì)胞的過程中，有時一次融合產(chǎn)生很多“陽性”孔，來不及對所有的雜交瘤細(xì)胞作進(jìn)一步的工作，需要把其中一部分細(xì)胞凍存起來；另一方面，為了防 止實驗室可能發(fā)生的意外事故，如停電、污染、培養(yǎng)箱的溫度或CO2控制器失靈等給正在建立中的雜交瘤帶來災(zāi)難，通常盡可能早地凍存一部分細(xì)胞作為種子，以 免遭到不測。在雜交瘤細(xì)胞建立以后，更需要凍存一大批，以備今后隨時取用。

（2）雜交瘤細(xì)胞的復(fù)蘇。雜交瘤細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞或其他細(xì)胞在液氮中保存，若無意外情況時，可保存數(shù)年至數(shù)十年。復(fù)蘇時融解細(xì)胞速度要快，使之迅速通過易受損的-5℃—0℃，以防細(xì)胞內(nèi)形成冰晶引起細(xì)胞死亡。

單抗特性的鑒定

⑴單克隆性的確定 包括雜交瘤細(xì)胞的染色體分析、單抗免疫球蛋白重鏈和輕鏈類型的鑒定和單抗純度鑒定等。

⑵單抗理化特性的鑒定。從實用意義上說，單抗對溫度和PH變化的敏感性以及單抗的親合力都是理化特性鑒定的主要項目，它們可為單抗的使用和保存提供重要依據(jù)。

⑶單抗與相應(yīng)抗原的反應(yīng)性測定。單抗與相應(yīng)抗原的反應(yīng)性決定于它所識別的抗原表位，確定單抗針對的表位在抗原結(jié)構(gòu)上的位置，是單抗特性鑒定的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，同時，進(jìn)一步分析這類表位的差別， 可正確評價單抗的特異性和交叉反應(yīng)性。特點

一是特異性，針對特定的單一抗原表位，它具有高度的特異性，抗腫瘤抗體藥物的研究表明，其特異性主要表現(xiàn)為特異性結(jié)合、選擇性殺傷靶細(xì)胞、體內(nèi)靶向性分布以及具有更強的療效。

二是多樣性，主要表現(xiàn)在靶抗原的多樣性、抗體結(jié)構(gòu)的多樣性、作用機制的多樣性等方面。

三是定向性，抗體藥物可以定向制造，就是根據(jù)需要制備具有不同**作用的抗體藥物。基于這些特點，我們可以用來制成“生物導(dǎo)彈”運送藥物至病害部位，主要是癌細(xì)胞，從而達(dá)到**效果。