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石蠟包埋固定及HE染色
上海達為科生物科技（上海）有限公司，主營實驗實驗技術(shù)服務，以下分析的是石蠟包埋固定及HE染色過程：
1、取材與固定
從人或動物新鮮尸體上取下組織塊(一般厚度不超過0、5厘米)投入預先配好的固定液中(10％福爾馬林，Bouin氏固定液等)使組織、細胞的蛋白質(zhì)變性凝固，以防止細胞死后的自溶或**的分解，從而保持細胞本來的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
2、脫水透明
一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑，逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精，又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明，以二甲苯替換出組織塊的中酒精，才能浸蠟包埋。
3、浸蠟包埋
將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中，放入溶蠟箱保溫。待石蠟浸入組織塊后進行包埋：先制備好容器(如折疊一小紙盒)，倒入已溶化的石蠟，迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬，才能在切片機上切成很薄的切片。
4、切片與貼片
將包埋好的蠟塊固定于切片機上，切成薄片，一般為4～6微米厚。切下的薄片往往皺折，要放到加熱的水中燙平（54℃），再貼到載玻片上，放45℃恒溫箱中烘干。
5、脫蠟染色
常用的染色法是蘇木素和伊紅染色（簡稱HE染色），以增加組織細胞結(jié)構(gòu)各部分的色彩差異，利于觀察。蘇木精(Hematoxylin，H)是一種堿性染料，可將細胞核和細胞內(nèi)核糖體染成藍紫色，被堿性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿性。伊紅(Eosin，E)是一種酸性染料，能將細胞質(zhì)染成紅色或淡紅色，被酸性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸性。對堿性染料和酸性染料親和力都不強的物質(zhì)，稱為中性物質(zhì)。細胞內(nèi)被染成藍色、紅色和呈淡色的顆粒分別稱為嗜堿性顆粒、嗜酸性顆粒和中性顆粒。染色前，須用二甲苯脫去切片中的石蠟，再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精，后入蒸餾水，就可染色。
HE染色過程是：
①將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘。
②酸水及氨水中分色，各數(shù)秒鐘。
③流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻。
④入70％和90％酒精中脫水各10分鐘。
⑤入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。
6、脫水透明：
染色后的切片經(jīng)純酒精脫水，再經(jīng)二甲苯使切片透明。
7、封固：
將已透明的切片滴上加拿大樹膠，蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后，貼上標箋，切片標本就可使用。我們在切片中所觀察到的標本，是將器官或組織用切片機切成薄片并粘貼在載玻片上，經(jīng)過染色等步驟制作而成。
