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原代細(xì)胞鑒定技術(shù)
原代細(xì)胞鑒定技術(shù)
上海達(dá)為科生物科技有限公司,位于上海長江軟件園,主要致力于免疫學(xué)、分子生物學(xué)、病理、病理分子生物、代謝組學(xué),生物化學(xué)技術(shù)的科研中的應(yīng)用和推廣,專業(yè)從事相關(guān)專業(yè)的引進(jìn),服務(wù)和研發(fā)。上海達(dá)為科生物,主營實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),動物實(shí)驗(yàn),細(xì)胞實(shí)驗(yàn)更是業(yè)內(nèi)權(quán)威,原點(diǎn)細(xì)胞鑒定技術(shù)更是不斷發(fā)展。
動物組織是由多種類型的細(xì)胞組成的,包括表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等。分離出的細(xì)胞是否是實(shí)驗(yàn)所需類型的細(xì)胞則需要進(jìn)行鑒定,除了基本的形態(tài)學(xué)觀察外常用的就是免疫組織化學(xué)檢測。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育隔夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
隨時(shí)生物技術(shù)和科技的日益發(fā)展,相信通過上海達(dá)為科全體員工的努力,原代細(xì)胞鑒定技術(shù)也會得到快速的發(fā)展,如果您對我們的產(chǎn)品感興趣,我相信我們的服務(wù)讓您滿意放心!