細(xì)胞培養(yǎng)技巧匯總-上海達(dá)為科告訴你

1、細(xì)胞復(fù)蘇和凍存遵循“慢凍快融”，復(fù)蘇細(xì)胞時盡可能短時間內(nèi)使凝固的細(xì)胞凍存液融化，37度水浴箱中快速搖晃。

2、凍存細(xì)胞時每個凍存管的凍存液不要超過1ml，過多的凍存液會使細(xì)胞復(fù)蘇時不易融化和融化時間過長。凍存液過多過滿時，在凍存液凝固時體積膨脹，易使凍存管撐開。

3、凍存時，凍存管蓋子千萬擰緊，否則凍存管內(nèi)進(jìn)入液氮。待復(fù)蘇時，凍存管內(nèi)液氮受熱迅速揮發(fā)膨脹，導(dǎo)致凍存管爆炸（血的教訓(xùn)）。

4、融化凍存的細(xì)胞后，轉(zhuǎn)到15ml離心管中，向離心管中緩慢滴加新鮮的培養(yǎng)基，使細(xì)胞內(nèi)的DMSO從細(xì)胞中釋放出來。

5、DMSO有毒，且易被皮膚吸收，做好防護(hù)措施。DMSO本身抑菌，不會長菌，切記打開DMSO瓶蓋時勿使用本生燈對瓶口**，否則極易使瓶口的DMSO揮發(fā)導(dǎo)致整個細(xì)胞房充滿了DMSO的毒氣。

6、剛復(fù)蘇的細(xì)胞很脆弱，吹打時動作輕柔。冰箱中拿出的培養(yǎng)基可以預(yù)先在培養(yǎng)箱中復(fù)溫再使用。

7、DMSO對細(xì)胞有毒性，細(xì)胞復(fù)蘇后，待細(xì)胞貼壁或**天更換新鮮培養(yǎng)基，同時去除死細(xì)胞。

8、細(xì)胞傳代、鋪板，各種規(guī)格培養(yǎng)皿參數(shù)

9、對于容易聚團(tuán)和粘附的細(xì)胞，剛剛鋪均勻，搖晃兩下就發(fā)現(xiàn)細(xì)胞又聚成一團(tuán)一團(tuán)。應(yīng)對方法：用1ml槍反復(fù)吹打細(xì)胞，吹均勻后立刻放入培養(yǎng)箱，不要搖晃也不要觀察，減少細(xì)胞晃動相互接觸。

10、細(xì)胞狀態(tài)不好了，怎么調(diào)整都沒有用，可以先將細(xì)胞進(jìn)行凍存后再復(fù)蘇，細(xì)胞會好很多，同時也會死很多，這叫優(yōu)勝劣汰，適者生存，存活下來的都是優(yōu)良的種子。

11、細(xì)胞一旦污染，堅決扔掉，重新復(fù)蘇新的細(xì)胞，沒有什么可以挽救細(xì)胞，包括***（除了以下情況）。

12、細(xì)胞如果污染了，并且沒有凍存的細(xì)胞，且非常珍貴，如何挽回？將培養(yǎng)的細(xì)胞接種于裸鼠皮下，并成瘤，將瘤組織再重新剪碎消化后培養(yǎng)到培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，由于裸鼠具有的免疫力，可以抵抗**感染，重新培養(yǎng)的瘤細(xì)胞則是無菌的，前提是該細(xì)胞能在裸鼠皮下成瘤。（原來裸鼠還有這個功能！）

13、凍存細(xì)胞時凍存液7：2：1，也可以5：4：1，血清****。凍存時遵守梯度降溫，緩慢降溫，可以使用梯度降溫盒，使用前將凍存盒復(fù)溫。沒有凍存盒可以4度放置20min, -20度放置20min, -80度過夜后移致液氮中。

14、細(xì)胞培養(yǎng)三條原則：1、維持營養(yǎng)：不能長時間不換液不傳代，細(xì)胞不能過密過多 2、避免污染：防止**，**，支原體污染，遵守?zé)o菌原則 3、防止消化過度：顯微鏡下觀察并控制消化情況。

15、各種培養(yǎng)試劑建議分裝個人使用，發(fā)現(xiàn)污染，可以毫不心疼的扔掉，同時可以避免交叉污染。

16、細(xì)胞培養(yǎng)箱上面的3個參數(shù)， CO2、水、溫度。一個出了問題都會導(dǎo)致細(xì)胞毀滅性的打擊，建議每次檢查下是否正常。

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