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細胞轉(zhuǎn)染方法與原則
細胞轉(zhuǎn)染在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等方面的應(yīng)用越來越廣泛。細胞轉(zhuǎn)染常用的主要有三種方法：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、電穿孔轉(zhuǎn)染以及病毒轉(zhuǎn)染。
脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是方便的方法之一，但轉(zhuǎn)染效率低，有細胞毒性，對細胞的選擇性也比較強?？s短消化后貼壁時間或是反式轉(zhuǎn)染（先在培養(yǎng)皿加入混合好的轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒，然后接種細胞）能夠在程度上提高轉(zhuǎn)染效率，但相對來說轉(zhuǎn)染效率還是比較低，尤其是對于HeLa、MDCK等細胞膜比較厚的“皮實”細胞，轉(zhuǎn)染效率就更低。
電穿孔轉(zhuǎn)染就是電流可逆地擊穿細胞膜形成瞬時小孔促使DNA分子進入胞內(nèi)。當遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或無法轉(zhuǎn)入時建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染。但一般對細胞損傷比較大。
對于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與電穿孔轉(zhuǎn)染都無法成功轉(zhuǎn)染的細胞系建議用病毒感染，但是轉(zhuǎn)染的基因片段不能太大，同時有的**風險，制備包裝病毒價格比較昂貴，比較適用于實驗室一次需要量很大的常用質(zhì)粒包裝。
基于電穿孔轉(zhuǎn)染的缺點，美國primax專門研究了iporation-Primax細胞轉(zhuǎn)染儀，他電轉(zhuǎn)的電流非常小，同時電流能根據(jù)細胞單層的直徑大小進行自適性調(diào)節(jié)，實現(xiàn)細胞在生理狀態(tài)下的電轉(zhuǎn)染，細胞死亡率比較低。同時一般的電轉(zhuǎn)染儀器適用于懸浮細胞或是需要將細胞消化后轉(zhuǎn)染，但這對細胞損傷比較大（尤其是原代細胞、干細胞等），同時對于某些貼壁生長的細胞不適用，iporation-Primax細胞轉(zhuǎn)染儀是在細胞貼壁的生理狀態(tài)下的高效轉(zhuǎn)染。
美國新墨西哥大學健康科學中心病理學系A(chǔ)ngela Wandinger-Ness教授實驗室應(yīng)用iporation-Primax細胞轉(zhuǎn)染腎多囊管狀上皮細胞和成牙質(zhì)細胞進行多囊腎病機制研究，成果“OFD1 and Flotillins Are Integral Components of a Ciliary Signaling Protein Complex Organized by Polycystins in Renal Epithelia and Odontoblasts”發(fā)表在Plos One。這是一個典型案例，原纖毛細胞在貼壁生長5天融合的狀態(tài)下才能形成纖毛細胞，因此進行類似貼壁生長的細胞研究，只能使用iporation-Primax細胞轉(zhuǎn)染儀 。
