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免疫組化染色的質(zhì)量控制
1、標(biāo)本在離體后應(yīng)立即浸泡于相當(dāng)于標(biāo)本體積8~10倍的標(biāo)準(zhǔn)固定液中，大標(biāo)本要剖開固定。離體后標(biāo)本固定前存放不得超過30分鐘。
2、在實(shí)際工作中，就可操作性而言，10%的緩沖福爾馬林是兼顧保存組織形態(tài)和抗原性通行的、被廣泛接受的選擇。
3、適度、適時(shí)的固定。一般而言，大標(biāo)本只要做到及時(shí)切開固定，在室溫下12小時(shí)即可達(dá)到固定要求；為了適應(yīng)免疫組化染色標(biāo)準(zhǔn)化的需要，標(biāo)本固定后應(yīng)及時(shí)取材，通常固定時(shí)間不得超過24小時(shí)。
4、達(dá)到固定時(shí)間要求而不能及時(shí)進(jìn)入脫水程序的標(biāo)本，建議將標(biāo)本置入70%的乙醇中進(jìn)行暫時(shí)保存直至進(jìn)入組織脫水程序。
脫水及制片
1、建立嚴(yán)格的組織脫水試劑規(guī)范化更換制度，組織處理質(zhì)量。
2、切片厚度一般3~4μm，厚薄均勻、平整，無刀痕、折疊，采用高質(zhì)量防脫載玻片。
3、切片在60℃烤箱內(nèi)烤2~3小時(shí)，或者70 ℃烤箱內(nèi)1小時(shí)。
4、脫蠟要和常規(guī)切片分開，使用單獨(dú)的二甲苯，如果溫度過低或二甲苯使用次數(shù)較多，可適當(dāng)延長脫蠟時(shí)間。
二、抗原修復(fù)
抗原修復(fù)的方式有多種，熱修復(fù)一般推薦高壓鍋熱修復(fù)法，但是微波修復(fù)也有其方便的一面。影響抗原修復(fù)的基本因素是加熱的溫度和加熱的時(shí)間，以及所使用的修復(fù)液的PH值。需要操作者在實(shí)際工作中摸索總結(jié)，同時(shí)要根據(jù)每種抗體的具體要求，找到較適合的修復(fù)方式。抗原修復(fù)的恰當(dāng)與否，直接關(guān)系到免疫組織化學(xué)染色的成敗，進(jìn)一步影響后結(jié)果的正確判讀。
三、抗體及檢測系統(tǒng)的選擇
選擇優(yōu)良的抗體和檢測試劑盒，新買抗體要進(jìn)行敏感性測試，找到佳的抗原修復(fù)條件，每次試驗(yàn)要設(shè)置相應(yīng)的陽性和陰性對(duì)照。
試劑的使用在其有效期內(nèi)，同時(shí)經(jīng)常觀察抗體使用過程中的結(jié)果變化，如不理想要及時(shí)更換。
四、顯色和復(fù)染
不要忽視顯色過程，和常規(guī)染色類似，顯色不恰當(dāng)也會(huì)造成染色的前功盡棄。不同的組織、不同的抗體顯色時(shí)間有差異，必要時(shí)使用顯微鏡觀察切片的顯色效果。
蘇木素復(fù)染過深過淺都會(huì)造成對(duì)比不清晰，不利于觀察評(píng)價(jià)。