智啟醫(yī)學新維度
服務電話: 180-1784-7121(微信同號)
RNA提取注意事項
1. 實驗中的一些好習慣
加入試劑之前,把它混勻一下,以免放置時間長了濃度不均;移液槍用完之后要歸到大計量的位置,防止久而久之彈簧失去彈性;要記著關水浴箱,切記切記;多和大家討論,同時多關注別人討論的經驗,這是快提高的捷徑了;所有的試劑都自己配,出了問題才好找原因。
2. 防止RNA酶污染的措施
(1)所有的玻璃器皿均應在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或更長時間;
(2)塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿沖洗(注意:有機玻璃器具因可被氯仿腐蝕,故不能使用);
(3)有機玻璃的電泳槽等,可先用去污劑洗滌,雙蒸水沖洗,乙醇干燥,再浸泡在3% H2O2 室溫10min,然后用0.1% DEPC水沖洗,晾干;
(4)配制的溶液應盡可能的用0.1% DEPC,在37℃處理12hr以上。然后用高壓**除去殘留的DEPC。不能高壓**的試劑,應當用DEPC處理過的無菌雙蒸水配制,然后經0.22μm濾膜過濾**;
(5)操作人員戴一次性口罩、帽子、手套,實驗過程中手套要勤換。
(6)設置RNA操作專用實驗室,所有器械等應為專用;
3. 常用的RNA酶抑制劑
(1)焦磷酸二乙酯(DEPC):是一種強烈但不的RNA酶抑制劑。它通過和RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環(huán)結合使蛋白質變性,從而抑制酶的活性;
(2)異硫氰酸胍:被認為是有效的RNA酶抑制劑,它在裂解組織的同時也使RNA酶失活。它既可破壞細胞結構使核酸從核蛋白中解離出來,又對RNA酶有強烈的變性作用;
(3)氧釩核糖核苷復合物:由氧化釩離子和核苷形成的復合物,它和RNA酶結合形成過渡態(tài)類物質,能抑制RNA酶的活性;
(4)RNA酶的蛋白抑制劑(RNasin):從大鼠肝或人胎盤中提取得來的酸性糖蛋白。RNasin是RNA酶的一種非競爭性抑制劑,可以和多種RNA酶結合,使其失活;
(5)其它:SDS、尿素、硅藻土等對RNA酶也有抑制作用。