深靜脈血栓形成(deep venous thrombosis,DVT)已成為影響人類健康的重要疾病,早期易并發(fā)致命性的肺栓塞,后期**腫脹、郁積性皮炎、頑固性小腿潰瘍等嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。因此,建立DVT動物模型是研究體內(nèi)靜脈血栓形成發(fā)病機(jī)制、病理生理變化和評價各種診治方法包括藥物干預(yù)的重要載體。文獻(xiàn)報道，應(yīng)用實(shí)驗(yàn)性靜脈血栓形成動物模型有50余年的歷史,約有18種不同的動物被用來制備模型。近年來,我國各種DVT動物模型取得了很大進(jìn)展,現(xiàn)將其綜述如下。

1、靜脈結(jié)扎(阻斷)法

此方法是通過血液瘀滯誘導(dǎo)靜脈血栓形成。結(jié)扎深靜脈,導(dǎo)致靜脈血液回流障礙,局部血流淤滯、缺氧,血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,啟動凝血過程。此外,血小板與局部形成的凝血因子也因血流受阻停留在局部,致使血栓形成。通常根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)動物,結(jié)扎的血管也各不相同。常用的方法如下。

1.1 下腔靜脈結(jié)扎法

Reyers等在1980年通過結(jié)扎大鼠下腔靜脈建立大鼠DVT模型。方法如下:麻醉大鼠后,沿腹白線切開進(jìn)腹,分離下腔靜脈,于左腎靜脈下方用粗絲線結(jié)扎下腔靜脈,縫合腹壁,結(jié)扎后2～6 h重新打開腹腔,在結(jié)扎線下方2cm處夾閉血管,剖開管腔,取出血栓,稱量血栓干重。一般在結(jié)扎后3h血栓形成率為60%～80%,結(jié)扎后6h血栓形成率為。以血栓形成百分率、血栓質(zhì)量、凝血及纖溶系統(tǒng)為研究對象。顧毅等采用此模型,插入Fogarty導(dǎo)管取栓,觀察不同時相導(dǎo)管取栓對靜脈壁的影響,探討應(yīng)用球囊導(dǎo)管取栓術(shù)**深靜脈血栓形成的時機(jī)。

還有學(xué)者在Reyers造模方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改良,張智輝等結(jié)扎大鼠下腔靜脈下段及雙側(cè)髂總靜脈制備后肢深靜脈血栓形成模型,血栓形成率均較單純結(jié)扎下腔靜脈高;賽力克?馬高維亞等在左腎靜脈與下腔靜脈交匯處用絲線把下腔靜脈與導(dǎo)絲一起結(jié)扎,血管夾阻斷下腔靜脈下段,1h后撤掉血管夾,抽出導(dǎo)絲,認(rèn)為此模型能保障血栓近心端血管通暢,符合人體DVT急性期的病理演變,是適合作為動態(tài)研究的動物模型。

還有報道采用單純下腔靜脈結(jié)扎法建立靜脈血栓家兔模型。綜合文獻(xiàn),制備兔下腔靜脈血栓模型者遠(yuǎn)少于大鼠下腔靜脈血栓模型,這與大鼠模型的易行性、經(jīng)濟(jì)性密切相關(guān)。

1.2 髂靜脈結(jié)扎法

高峰等采用髂靜脈結(jié)扎法成功制備大鼠模型。方法:麻醉大鼠后,取下腹部正中切口,打開后腹膜,顯露左髂動、靜脈,6-0單絲尼龍線依次縫扎左髂靜脈近端、沿途屬支及遠(yuǎn)端。40min即見肉眼血栓形成。作者認(rèn)為此模型與犬、豬、貓、兔等體型較大的動物模型相比,有術(shù)后管理容易,死亡率低等優(yōu)勢,且在解剖位置上可以模仿臨床病例。缺點(diǎn):大鼠髂靜脈較細(xì),不易解剖分離。

1.3 股靜脈結(jié)扎(阻斷)

常選用犬、兔等形體較大的動物。方法:暫時結(jié)扎(或阻斷)股靜脈近、遠(yuǎn)端,血栓形成后,松開結(jié)扎線或解除阻斷。采用此模型,戎建杰等研究和比較導(dǎo)管直接溶栓和系統(tǒng)性溶栓對急性深靜脈血栓形成后靜脈壁形態(tài)學(xué)的影響及近期療效;王輝等根據(jù)血栓形成不同時期應(yīng)用超聲消融儀的超聲溶栓效果、血管再通情況、靜脈壁及瓣膜的病理變化,探討腔內(nèi)超聲溶栓**深靜脈血栓的療效;周為民等則通過觀察Amplatz血栓消融術(shù)、經(jīng)導(dǎo)管藥物溶栓及外科取栓術(shù)對急性股靜脈血栓形成后靜脈壁形態(tài)學(xué)的影響，探討這三種**方法的各自優(yōu)勢。

2、機(jī)械性損傷法

采用器械損傷血管,使內(nèi)皮下細(xì)胞外基質(zhì)裸露,促使血小板與膠原接觸而被激活和黏附,形成血栓。該方法主要是模擬創(chuàng)傷后或手術(shù)后肢體制動等而導(dǎo)致的深靜脈血栓形成,能較好的反映創(chuàng)傷后發(fā)生深靜脈血栓形成的病理變化過程。何飛等采用擊打裝置,以固定能量擊打兔左側(cè)大腿近端外側(cè),石膏固定左下肢屈髖屈膝位,7天后即成功制備創(chuàng)傷性肢體DVT模型。張春強(qiáng)等將大鼠麻醉后,切開皮膚,顯露股靜脈,直接鉗夾股靜脈,制備急性大鼠創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成模型;采用定量打擊大鼠雙側(cè)大腿+石膏固定的方法制備亞急性大鼠創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成,觀察炎癥相關(guān)基因的表達(dá)變化,探討炎癥在創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成中的意義。

3、電流損傷法

利用電刺激,損傷血管內(nèi)膜,啟動凝血機(jī)制,從而導(dǎo)致深靜脈血栓形成。楊軍先給大鼠肌注地塞米松磷酸鈉注射液(1mg/kg體重),每日1次,連續(xù)7天。第8天麻醉大鼠后,取股內(nèi)側(cè)縱行切口,游離股靜脈主干長約1.5cm,將實(shí)驗(yàn)性體內(nèi)血栓形成測定儀的正、負(fù)電極分別置于股靜脈的遠(yuǎn)、近端,接通直流電(1.5mA),持續(xù)刺激7min。成功制備大鼠DVT模型,探討藥物抗靜脈血栓形成的藥理作用。

4 靜脈異物法

此方法通常暫時阻斷局部血管血流,然后插入異物(銅絲),啟動內(nèi)、外源性凝血過程，促發(fā)靜脈血栓形成。國內(nèi)學(xué)者依照Knight等方法建立犬、兔動物模型。麻醉動物后,沿股靜脈走向切開皮膚，鈍性分離皮下組織及肌肉,充分暴露股靜脈,于其近端和遠(yuǎn)端分別上血管，向近心端插入自制的螺旋銅絲,縫合血管，確定血管再通后,逐層縫合。此模型旨在評估放射性核素標(biāo)記抗血栓成分(血小板和纖維蛋白)的單克隆抗體對體內(nèi)新、舊血栓的放免顯像研究。

5、光化學(xué)法

本法是將光敏物質(zhì)注射入動物血管內(nèi),在特定的波長的光線照射下,發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生單線態(tài)氧等活性氧,繼而損傷靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,激發(fā)血小板黏附、聚集而形成血栓。朱聽等利用光化學(xué)誘導(dǎo)倉鼠股靜脈血栓形成,并采用數(shù)字顯微縮時攝影記錄血栓形成的過程,通過數(shù)字處理獲得血栓的三維圖像,可用于血栓形成機(jī)理和抗栓藥物的研究。

6、血栓誘導(dǎo)劑致血栓形成法

通常局部血管注射凝血酶，啟動凝血過程,形成血栓。張鵬等在DSA的導(dǎo)引下，經(jīng)頸外靜脈及股靜脈途徑分別將直徑10mm和6mm的球囊導(dǎo)管置于髂總靜脈近心端及股靜脈遠(yuǎn)心端，充盈球囊阻斷血流，并經(jīng)導(dǎo)管注入凝血酶100U，1h后彩超檢查證實(shí)血栓形成，4h后抽癟球囊退出導(dǎo)管,成功建立犬靜脈血栓模型,認(rèn)為介入技術(shù)建立的犬下肢DVT模型具有操作簡單、創(chuàng)傷小、動物易存活,血栓形成快速可靠地優(yōu)點(diǎn),有利于深靜脈血栓的影像學(xué)診斷和臨床**研究。

7、展望和問題

建立合適的DVT模型是研究DVT發(fā)病機(jī)制和**方法的基本前提。當(dāng)前,DVT動物模型仍是誘發(fā)性動物模型,主要以阻斷靜脈回流,造成血液淤滯誘發(fā)血栓形成為主,注入血栓誘導(dǎo)劑或(和)機(jī)械性損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞為輔,并建立了一些較為可靠、易行的動物模型,如對藥物抗血栓機(jī)制的研究,下腔靜脈結(jié)扎法大鼠血栓模型為經(jīng)濟(jì)、常用;犬、兔等股靜脈血栓模型常用于血管介入溶栓、取栓及對血栓放免顯像診斷的研究,但費(fèi)用高、造模術(shù)后管理困難大等。國外還有文獻(xiàn)報道利用基因敲除或轉(zhuǎn)基因老鼠,制備DVT模型,有助于對DVT發(fā)病機(jī)制進(jìn)行更深入研究。DVT的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,公認(rèn)是Virchow的三大發(fā)病因素,即血流滯緩、血液高凝、靜脈壁的損傷相互作用的結(jié)果。研究表明中醫(yī)藥可以從多環(huán)節(jié)、多層次干預(yù)DVT的發(fā)生、發(fā)展,具有良好的針對性和科學(xué)性,但缺少病癥結(jié)合的DVT動物模型。因此,如何能制造出更加接近臨床狀態(tài)、符合中醫(yī)證候的DVT模型,將是今后推進(jìn)深靜脈血栓形成防治研究的關(guān)鍵,也是我們需要努力研究的問題。