臨床的卵巢早衰(POF)是指卵巢功能提前減退，常見為女性在40歲以前出現(xiàn)閉經(jīng)，以閉經(jīng)，不育，雌**缺乏以及促性腺**水平升高為特征的一種疾病。在人群中發(fā)病率為1%~3%，在繼發(fā)性閉經(jīng)中占2%~10%，診斷以至少半年或半年以上閉經(jīng)多次發(fā)生，排除其他原因?yàn)榛A(chǔ)，卵巢早衰是婦科分泌領(lǐng)域的常見病。

POF病因多種多樣，具體發(fā)病機(jī)制尚不清楚，為了尋找病因和有效的**方法，就建立與人類臨床表現(xiàn)和發(fā)病機(jī)制相似的動(dòng)物模型。國內(nèi)外專家學(xué)者根據(jù)POF的病因的多樣性建立了不同的動(dòng)物模型。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

雌性Wistar大鼠。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

本實(shí)驗(yàn)選用雌性Wistar大鼠40只，體重260~300 g，隨機(jī)分成2組。正常對照組：20只。實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M：20只。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 POF大鼠模型制備 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M雌性Wistar大鼠用雷公藤多甙片(10 mg/片)，0.6 mg/(100 g?d)體重，灌胃1次/d，連續(xù)9 d，建立POF動(dòng)物模型。

1.3.2 組化標(biāo)本制備

對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用1％****鈉(40 ml/kg)腹腔麻醉后開胸，經(jīng)左心室70滴/min滴入1％肝素鈉的生理鹽水500 ml，同時(shí)剪開右心耳。繼用0.1 m磷酸鹽緩沖液(PBS,PH=7.4)配制的固定液(含4％多聚甲醛)灌流固定。取出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的卵巢組織，放入含4％多聚甲醛PBS的固定液中進(jìn)行后固定大約2 h，之后將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的卵巢組織切成薄片移入含20％蔗糖的PBS中。在4℃冰箱中存放，至組織薄片沉底，經(jīng)水包埋，恒冷箱連續(xù)橫切片，片厚20 μm。經(jīng)OCT包埋，恒冷箱連續(xù)切片，片厚16 μm，-70℃保存?zhèn)溆谩?

1.3.3 尼氏染色

冷凍切片吹干，經(jīng)PBS漂洗5 min 3次，將切片置入1%甲苯胺藍(lán)溶液中37℃孵育90 min，取出后用蒸餾水沖洗，PBS漂洗5 min 3次，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，光濕微鏡下觀察。

2 結(jié)果

尼氏染色結(jié)果:

正常對照組大鼠卵巢的尼氏染色切片上，卵泡數(shù)目正常，卵泡無閉鎖，間質(zhì)無明顯增生。

實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠卵巢可見卵巢萎縮，卵泡數(shù)目減少，卵泡閉鎖增多，間質(zhì)增生明顯。

根據(jù)尼氏染色結(jié)果證明POF動(dòng)物模型制備成功。

3 討論

由于POF的病因與發(fā)病機(jī)理尚不清楚，為了尋找此病的有效的**方法及發(fā)**展規(guī)律，建立切實(shí)可靠的POF模型顯得由為重要。根據(jù)的各種造模結(jié)果來看，藥物型POF模型簡單可靠，容易操作，可作為研究POF的模型，但是由于方法還不夠成熟，需要更進(jìn)一步的探討藥物的劑量與給要時(shí)間以造出理想的模型。為臨床的**提供有效數(shù)據(jù)，造模型的同時(shí)，更要探討對其他一些器官的影響。如肝、腎、神經(jīng)系統(tǒng)等，這會(huì)對人類的健康具有更大的意義。