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細(xì)胞分選實驗
一、服務(wù)介紹
細(xì)胞分選是據(jù)細(xì)胞的屬性，將混合細(xì)胞分為具有不同特性的幾個不同類群的方法。細(xì)胞分選常用的方法是流式細(xì)胞儀分選和免疫磁珠細(xì)胞分選。此技術(shù)廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)中。
二、實驗原理
流式細(xì)胞分選是利用流式細(xì)胞分選儀，對細(xì)胞的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學(xué)性狀及功能狀態(tài)等進(jìn)行定性或定量檢測，它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強度和波長將發(fā)光顆粒亞群分開并可實現(xiàn)單克隆分選，對復(fù)雜樣本中的細(xì)胞進(jìn)行鑒定、分類、定量和分離。免疫磁珠細(xì)胞分選是把細(xì)胞用超級順磁性的 MACS MicroBeads （MACS微型磁珠）特異性地標(biāo)記，磁性標(biāo)記完后，把這些細(xì)胞通過一個放在強而穩(wěn)定磁場中的分選柱。分選柱里的基質(zhì)造成一個高梯度磁場。被磁性標(biāo)記的細(xì)胞滯留在柱里而未被標(biāo)記的細(xì)胞則流出。當(dāng)分選柱移出磁場后，滯留柱內(nèi)的磁性標(biāo)記細(xì)胞就可以被洗脫出來，這樣就可以獲得標(biāo)記和未標(biāo)記的兩個細(xì)胞組份。
三、實驗流程
流式細(xì)胞分選
1. 取1×105個待檢測的細(xì)胞，加5 ml DPBS洗滌，室溫2000 r/min離心5 min，棄上清，然后用200 μl 0.5% BSA-DPBS重懸細(xì)胞；
2. 想細(xì)胞懸液中加入熒光染料標(biāo)記的抗體，4℃孵育30 min；
3. 將染好的細(xì)胞用0.5% BSA-DPBS 洗滌兩次，然后用500 μl 0.5% BSA-DPBS重懸，流式細(xì)胞儀檢測；
4. 結(jié)果統(tǒng)計分析。
磁珠細(xì)胞分選方法
1. 離心收集待分離細(xì)胞，用少量PBE孵育液（0.5%BSA、0.08%EDTA，PH7.2），真空抽濾**及液體內(nèi)氣體，充分混懸細(xì)胞（0.5 ml/1×108細(xì)胞），加入一抗（10-20 μg/ml終濃度），4℃孵育30 min；
2. 用20倍體積PBE洗細(xì)胞一次，再加PBE（0.3 ml/1×108細(xì)胞）充分混懸細(xì)胞后，加入相應(yīng)二抗包被的超微磁珠，混勻后置8~15℃孵育10~15 min；
3. 將分離柱安裝入磁場中，加入0.5 ml PBE，在重力作用下自然流盡,以預(yù)處理分離柱。
