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在磁珠分選細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意事項(xiàng)
免疫磁珠法分離細(xì)胞原理：
是基于細(xì)胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合，在外加磁場當(dāng)中，通過抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在磁場中，而無該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與鏈接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒有磁場，不在磁場中停留，從而使細(xì)胞得以分離。
磁珠分選細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意事項(xiàng)：
1、待分選細(xì)胞中如有貼壁細(xì)胞，建議在分選前先貼壁培養(yǎng)去除，或者提高EDTA濃度。
2、抗體包被磁珠對死細(xì)胞常有非特異性結(jié)合。因而分選前去除死細(xì)胞。
3、新鮮分離骨髓細(xì)胞，先用膠原酶、DNA酶、胰酶聯(lián)合消化，可使細(xì)胞團(tuán)塊解聚，從而提高分離效率。
4、上分離柱前，充分振蕩，混懸細(xì)胞，打散細(xì)胞團(tuán)塊。
5、用分離柱分選，應(yīng)用真空抽濾水，減少水中氣泡，使分離柱不被氣泡阻滯。
6、細(xì)胞懸液加入分離柱中時，應(yīng)將滴管伸至底壁后加入，避免將細(xì)懸液沿管壁流入，使管壁殘流末分選細(xì)胞，以致后繼洗柱過程中，因疏忽末被洗下，后導(dǎo)致純度不高。洗柱時，應(yīng)在前次液體充分流盡后，再加洗液。
7、分選細(xì)胞量應(yīng)根據(jù)說明書控制，不超量。
8、孵育時間和溫度應(yīng)按說明書進(jìn)行，延長孵育時間、提高溫度會增加非特異結(jié)合。
9、先用抗體阻斷Fc受體，可降低非特異性結(jié)合。