智啟醫(yī)學(xué)新維度
服務(wù)電話： 180-1784-7121（微信同號）
細(xì)胞遷移實驗注意事項
細(xì)胞遷移實驗的注意事項
（1）根據(jù)待測細(xì)胞體積大小選擇合適孔徑的ThinCert。常用的為8.0-μm孔徑
（如AGS細(xì)胞），如果細(xì)胞體積較大可以考慮用10-μm孔徑；
（2）根據(jù)待測細(xì)胞遷移能力強(qiáng)弱調(diào)整細(xì)胞數(shù)和遷移時間。常規(guī)24-well
ThinCert接種細(xì)胞數(shù)約為2≈5×104/well，遷移時間12≈36小時；
（3）由于Greiner公司的24-Transwell內(nèi)含24個獨立的ThinCert，為了避免
操作污染，每次實驗可預(yù)先另準(zhǔn)備一塊24孔普通培養(yǎng)板（Greiner）；
（4）如果細(xì)胞遷移能力較弱，下室液體可用3T3細(xì)胞無血清培養(yǎng)24小時獲得的
上清加50μg/ml FN（Fibronectin），具體可查閱相關(guān)文獻(xiàn)；
（5）細(xì)胞懸液加入膜中央，盡量液面水平；
（6）固定染色擦洗時動作小心，避免擦去膜底面的細(xì)胞。但要充分擦凈膜
表面上未遷移的細(xì)胞，以免影響讀數(shù)。尤其是膜周邊上可用細(xì)牙簽或小鑷
子**濕棉花擦洗，但要小心避免將膜戳破；
（7）Chamber和膜上都無法標(biāo)記，操作時應(yīng)小心避免混淆實驗組和對照組；
（8）充分晾干，避免殘留水分導(dǎo)致鏡下聚焦不一致。
細(xì)胞侵襲實驗（cell invasion assay）
實驗材料
（1）Matrigel (BD 5mg/ml)，-20℃保存
（2）其余材料同遷移實驗
