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小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)
小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方法原理
將小鼠的肝細(xì)胞從機(jī)體中取出，經(jīng)胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖。
小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)材料
小鼠
試劑、試劑盒
DMEM無血清DMEM培養(yǎng)基胰酶PBS
儀器、耗材 飯盒紗布剪子鑷子燒杯平皿研磨玻片濾網(wǎng)離心管6孔培養(yǎng)板吸管移液管手套微量加樣器
小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟
一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備
1.動(dòng)物：小鼠。
2.試劑：DMEM(含血清)、無血清DMEM培養(yǎng)基、胰酶、PBS。
3.器械：飯盒、紗布、小剪子、小鑷子、大鑷子、大燒杯、平皿、研磨玻片、濾網(wǎng)、離心管(15/50 ml)、6孔培養(yǎng)板、吸管、移液管、手套、微量加樣器。
4.準(zhǔn)備：酒精擦拭臺(tái)面后把物品擺放好，開紫外線燈照30分鐘后開鼓風(fēng)機(jī)吹至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
二、方法
1.將小鼠斷頸致死，置75%酒精泡2-3秒鐘，取肝臟，置于盛有PBS的平皿中。
2.剔除脂肪、結(jié)締組織、血液等雜物，轉(zhuǎn)移到另一個(gè)盛有PBS液的平皿中。
3.用手術(shù)剪將臟器剪成小塊(大小約1mm2)，玻片研磨，轉(zhuǎn)到離心管，離心(1 000 rpm，5 min)。
4.視組織或細(xì)胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶，37℃中消化20分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次，使細(xì)胞分離。
5.加入3-5 ml含血清的培養(yǎng)液以中止胰酶消化作用。
6.用100目孔徑濾網(wǎng)濾過，除去未消化的大組織塊。
7.再次離心5 min，棄上清液。
8.加入無血清培養(yǎng)液5 ml，沖散細(xì)胞，再離心一次，棄上清液。
9.加入含血清的培養(yǎng)液1-2 ml(視細(xì)胞量)，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
注意事項(xiàng)：
小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，從實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)到實(shí)驗(yàn)過程中的操作，都需要嚴(yán)格控制無菌。由于細(xì)胞對(duì)于生長的條件比較苛刻，所以小鼠肝細(xì)胞無論從實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)，還是使用的物品及細(xì)胞培養(yǎng)的操作過程，都要注意保持無菌環(huán)境。
