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6分的microRNA,這樣發(fā)表
話說要是十年前，你研究miRNA，那可是熱的不能再熱的領(lǐng)域了，然而今天我依然在研究miRNA，有人就開始懟我了：還在研究miRNA呢，你做一大堆工作還不是只能發(fā)一兩分，有意思嗎？
之前我確實也有過這樣的擔憂，研究miRNA還有意思嗎？正如之前做的在體外構(gòu)建一個肺癌缺氧的模型，然后用芯片篩查miRNA差異表達，通過miRNA表達譜，得到實驗組與正常組miRNAs的高表達和低表達，然后進行驗證。這樣的文章確實分數(shù)不高，但是也不能說研究miRNA就不能發(fā)高分文章了吧，來看看這篇，六分也是妥妥的。
MiR-127 and miR-376a act as tumor suppressors by in vivo targeting of COA1and PDIA6 in giant cell tumor of bone
發(fā)表在Cancer Lett上，簡要地背景介紹：骨巨細胞瘤（GCTB）是原發(fā)性骨腫瘤的一種，雖然大體上屬于良性腫瘤，但是由于一般與膨脹性溶骨性缺損相關(guān)，其具有高復(fù)發(fā)率和潛在的惡性轉(zhuǎn)化。組織學上，骨巨細胞瘤包括各種多核巨細胞、組織細胞和成纖維細胞樣基質(zhì)細胞（gctsc）。
而gctsc應(yīng)該能夠代表骨巨細胞瘤群，因為它們不僅具有無限增殖的能力，而且有能在小鼠或受精雞蛋的絨毛尿囊膜上的成瘤性。gctscs驅(qū)動腫瘤是由單核細胞的聚集和RANKL（受體激活NF-κBκ配體）介導(dǎo)的破骨細胞的形成。然而，促進腫瘤發(fā)展的分子機制還未知。
方法從組織樣本中分離出主要的gctsc，進行傳代培養(yǎng)。然后進行原代細胞系轉(zhuǎn)染，提取細胞的總RNA進行逆轉(zhuǎn)錄和實時熒光定量PCR，然后進行雞胚異種移植的體內(nèi)實驗，原位雜交，后得出數(shù)據(jù)分析。
是候選miRNA和靶基因的鑒定，實驗組GCT（巨瘤細胞）和對照組MSC（間充質(zhì)干細胞）有差異表達的miRNAs,通過進一步控制條件和文獻查閱已經(jīng)報道的相關(guān)基因，鎖定在miR 127-3p, miR-376a-3p和相關(guān)的靶基因COA1（細胞色素C氧化酶組裝因子1）和PDIA6（蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶家族成員6）。
在對候選miRNA和靶基因表達的調(diào)控驗證過程中，利用野生型WT和陰性對照NC來進行實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡，得到的結(jié)果是正如預(yù)期的那樣，用miRNA模擬轉(zhuǎn)染導(dǎo)致mir-127-3p和mir-376a-3p表達水平明顯高于野生型和陰性對照細胞，因此，PDIA6和CoAl的表達通過miRNA表達的恢復(fù)和轉(zhuǎn)染靶基因特異性siRNA而顯著下降。
為了探討候選miRNAs的恢復(fù)是否可能影響腫瘤細胞植入和生長的作用，將gctsc轉(zhuǎn)染細胞株移植到雞胚CAM。針對mir-127-3p和mir-376a-3p恢復(fù)是否抑制腫瘤體內(nèi)植入和生長。
從圖中也可以明顯看出，在用gctsc細胞瞬時轉(zhuǎn)染miRNA模擬物和移植后，根據(jù)測定每個異種移植的大小、體積等，發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生率相當高，對mir-127-3p和mir-376a-3p恢復(fù)后腫瘤發(fā)生率減少到17%和47%。
同樣，siRNA介導(dǎo)的miR-127和miR-376a沉默也在體內(nèi)表現(xiàn)出抑制腫瘤的生長。
后，文章總結(jié)出幾點全文重要的觀點：
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miR-127和miR-376a在體內(nèi)作為腫瘤抑制劑；
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恢復(fù)miR-127和miR-376a的表達能夠降低腫瘤的生長；
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沉默靶基因PDIA6和CoAl可以減緩腫瘤的生長。
統(tǒng)觀全文，就是這三點翻過來翻過去地論證，值得一提的是文章中的異種移植的模型是通過gctsc轉(zhuǎn)染細胞株移植到雞胚CAM，有的**性?？赐晡恼?，是不是覺得這六分的也不是太難，文章中作者用到的原位雜交和實時熒光定量PCR,上海達為科生物，主營實驗技術(shù)服務(wù)，如想了解文章,原位雜交等試驗外包的更多內(nèi)容，歡迎來電咨詢18017844061，我們講熱情為您服務(wù)！
