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實驗外包助手—WB的步如果做到

日期:2025-05-04 03:40
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摘要: SDS-PAGE作為一個老生常談的實驗,早已廣為科研者所知。然而該實驗雖然基礎(chǔ),但是細(xì)節(jié)繁瑣,耗時長久,光是配制試劑就要花費2個小時左右。而這還只是Western blot(WB)的步,也使得完成WB實驗將會耗費2天左右的時間。 實驗中種種試劑、抗體等等均是完成實驗這座大廈的基石,如果基石打不牢,實驗很有可能會半路夭折。而實驗中痛苦的莫過于與實驗結(jié)果就差那么一步之遙。 以Western blot(WB)為例,這眼瞅著就要到條帶現(xiàn)身的奇跡時刻,卻愣是讓曝光試劑的匱乏給硬生生的截斷了見證過程,又怎會不讓人懊惱...

SDS-PAGE作為一個老生常談的實驗,早已廣為科研者所知。然而該實驗雖然基礎(chǔ),但是細(xì)節(jié)繁瑣,耗時長久,光是配制試劑就要花費2個小時左右。而這還只是Western blot(WB)的步,也使得完成WB實驗將會耗費2天左右的時間。

實驗中種種試劑、抗體等等均是完成實驗這座大廈的基石,如果基石打不牢,實驗很有可能會半路夭折。而實驗中痛苦的莫過于與實驗結(jié)果就差那么一步之遙。

以Western blot(WB)為例,這眼瞅著就要到條帶現(xiàn)身的奇跡時刻,卻愣是讓曝光試劑的匱乏給硬生生的截斷了見證過程,又怎會不讓人懊惱上火呢?

其實,上述窘境皆是科研者在實驗前準(zhǔn)備不足所致,若是能提前發(fā)現(xiàn)試劑的不足,或?qū)υ噭┲匦掠嗁?,又或者重新配制溶液,均能再次推進(jìn)實驗進(jìn)程。然而就這訂購或配制試劑的過程無疑會消耗我們的時間以及精力。

那么為了避免原材料浪費以及節(jié)省更多的時間,SDS-PAGE電泳過程中的一些試劑還是早早的配制并妥善保存起來為好,如此方可以備不時之需。

緩沖液(buffer):

關(guān)于這一點,你可能早已知曉,但再次重復(fù)一遍也不是壞事。實驗中可將所有的凝膠緩沖液進(jìn)行一次性大量配制,如此可方便后續(xù)實驗中對其的使用。至于配制的濃度,10x濃度是實驗室配制母液常用的濃度。

有些實驗室會多次重復(fù)利用這些凝膠電泳緩沖液,在這種情況下,建議每次使用buffer時均要在緩沖瓶上貼一個標(biāo)簽,已記錄使用的次數(shù),超過期限后就要對緩沖液進(jìn)行重新配制,以免對實驗結(jié)果造成影響。

過硫酸銨(APS):

小編在接觸SDS-PAGE電泳之初,每次配膠時均會制備新鮮的APS,可后來發(fā)現(xiàn)溶解后的APS在分裝后,可在-20℃冰箱中得以長期儲存。

另外,如果你需要經(jīng)常使用SDS-PAGE凝膠,那么可取出一只分裝后的APS溶液,將其置于4℃冰箱里,可其一個月不會過期。

緩沖液不夠用?準(zhǔn)備些彈珠吧

有時,實驗過程中,你會忽然發(fā)現(xiàn)沒有足夠的電泳緩沖液,此時一個節(jié)省時間的方法就是在現(xiàn)有電泳緩沖液添加一些彈珠(是的,就是我們小時候曾經(jīng)玩過的),以提高緩沖液的高度水平來緩沖液能沒過上樣孔。

但是要這些彈珠是潔凈的,否則一旦其對上樣的蛋白樣品造成了污染,就不要妄想此次實驗會得到一張漂亮的實驗結(jié)果圖片了。

這次就先為大家分享這些技巧,希望您多多關(guān)注實驗外包助手。







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