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iTRAQ技術(shù)有哪些優(yōu)勢
iTRAQ技術(shù)，即同位素相對標記與定量技術(shù)。該技術(shù)可對復(fù)雜樣本、細胞器、細胞裂解液等樣本進行相對和定量研究，具有較好的定量效果、較高的重復(fù)性。由于其能夠同時對多達8種樣品進行標記分析,故在生命科學(xué)的各個領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。
iTRAQ和TMT是運用廣泛的兩種標記定量蛋白質(zhì)組技術(shù)，分別通過與氨基酸末端氨基以及賴氨酸殘基的游離氨基結(jié)合，實現(xiàn)對多肽的標記，并通過不同分子量的試劑對不同來源樣品進行標記的方式實現(xiàn)不同樣品間蛋白質(zhì)組比較的目標。以iTRAQ試劑為例，該試劑結(jié)構(gòu)由指示基團、中性平衡基團和反應(yīng)基團三部分組成。不同指示基團及其相對應(yīng)平衡基團的質(zhì)量和都相同，而反應(yīng)基團能與賴氨酸ε氨基和所有肽鏈的氨基末端連接，可標記所有氨基酸。不同標記試劑與來源于不同樣品胰酶消化后的肽段結(jié)合，經(jīng)過色譜分離，并通過質(zhì)譜和二級質(zhì)譜。平衡基團在二級質(zhì)譜時發(fā)生中性丟失，而報告基團在二級質(zhì)譜低質(zhì)量區(qū)域產(chǎn)生多個報告離子，其信號強度分別代表該標記樣品的表達量，根據(jù)報告離子的峰面積計算同一蛋白質(zhì)同一肽段在不同樣品間的比值，從而實現(xiàn)蛋白的相對和定量。
iTRAQ標記定量蛋白質(zhì)組通量高
可以同時進行8個樣品的分離鑒定和定量，提高了實驗通量，可以進行多個時間點蛋白質(zhì)組的動態(tài)監(jiān)測。
重復(fù)性好
來源不同的樣品可以同時進行色譜分離和質(zhì)譜鑒定，大大增強實驗的重復(fù)性，低可以檢測到不同樣品間5%的蛋白差異變化。
分辨率高、定量準確
AB EX公司的TripleTOF 5600系統(tǒng)和Thermo公司的Q-Exactive系統(tǒng)是上極少數(shù)具有準確質(zhì)量數(shù)與高分辨率進行同時定量和定性分析的LC-MSMS系統(tǒng)。先進的儀器再配上iTRAQ試劑本身基于報告離子的定量原理和高達99%的蛋白標記效率，使得鑒定到的蛋白數(shù)量更多，同時也了結(jié)果的可靠性。
鑒定結(jié)果可靠、蛋白檢測范圍廣
二級質(zhì)譜可以產(chǎn)生很好的y、b離子系列，蛋白序列覆蓋率提高，鑒定結(jié)果更可靠，同時一個蛋白質(zhì)有多個肽段被鑒定，進一步提高了定量的準確性。此外，iTRAQ實驗在肽段水平進行蛋白分離和鑒定，大大提高膜蛋白等難溶性蛋白的溶解性，擴大蛋白檢測范圍。
