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數(shù)字PCR的原理及應(yīng)用領(lǐng)域

日期：2025-05-04 04:14

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摘要：在定量PCR時，我們常常糾結(jié)一個問題，究竟是相對定量還是定量呢？如今，你無需糾結(jié)了，因為數(shù)字PCR（digital PCR）來了。盡管這兩種技術(shù)有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線或參照基因來測定核酸量，而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，是對起始樣品的定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域：拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達(dá)研究（如等位基因不平衡表達(dá)）、二代測序結(jié)果驗證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。數(shù)字PCR是一...

在定量PCR時，我們常常糾結(jié)一個問題，究竟是相對定量還是定量呢？如今，你無需糾結(jié)了，因為數(shù)字PCR（digital PCR）來了。盡管這兩種技術(shù)有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線或參照基因來測定核酸量，而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，是對起始樣品的定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域：拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達(dá)研究（如等位基因不平衡表達(dá)）、二代測序結(jié)果驗證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。

數(shù)字PCR是一種核酸分子定量技術(shù)。當(dāng)前核酸分子的定量有三種方法，光度法基于核酸分子的吸光度來定量；實時熒光定量PCR（Real Time PCR）基于Ct值，Ct值就是指可以檢測到熒光值對應(yīng)的循環(huán)數(shù)；數(shù)字PCR是的定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來進(jìn)行計數(shù)的核酸定量，是一種定量的方法。主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。

PCR實際上是一個在模板DNA、引物(模板片段兩端的已知序列)和四種脫氧核苷酸等存在的情況下，DNA聚合酶依賴的酶促合成反應(yīng)，擴(kuò)增的特異性取決于引物與模板DNA的特異結(jié)合。

數(shù)字PCR(Digital PCR)儀器應(yīng)用領(lǐng)域：

癌癥生物標(biāo)志物研究和拷貝數(shù)變異分析以**的靈敏度和準(zhǔn)確度測量癌癥突變的變異程度、

檢測稀有的DNA靶拷貝以及解析拷貝數(shù)變異狀態(tài)。