智啟醫(yī)學(xué)新維度
服務(wù)電話： 180-1784-7121（微信同號）
IHC/ICC 常見問題分析
1. 無染色
①脫蠟不：延長脫蠟時(shí)間，更換二甲苯。
②固定步驟（使用福爾馬林和多聚甲醛固定劑）修飾了抗體識別表位：抗原修復(fù)法暴露出抗原表位，縮短固定時(shí)間。
③蛋白位于細(xì)胞核內(nèi)（核蛋白），抗體不能穿透核膜：在封閉液和抗體稀釋液中加入通透劑。
④PBS緩沖液被**污染后破壞了靶蛋白的磷酸根：在抗體PBS儲(chǔ)存液中加入0.01%疊氮化合物，或使用新鮮無菌的PBS。
⑤由于不當(dāng)儲(chǔ)存、稀釋或反復(fù)凍融造成一抗/二抗試劑盒失效：做陽性對照確認(rèn)一抗/二抗試劑盒的有效性。
2. 高背景
①沒有封閉非特異性結(jié)合或封閉不充分：延長封閉時(shí)間，并考慮改換封閉劑。
②一抗?jié)舛冗^高：滴定法尋找到適宜抗體濃度，或在濃度較低抗體中延長孵育時(shí)間（建議是緩慢而準(zhǔn)確地結(jié)合）。
③存在內(nèi)源性過氧化物酶活性：用酶抑制劑如抑制堿性磷酸酶的鹽酸**咪唑(2mM)，或抑制過氧化物酶的H2O2(0.3% v/v)。
④固定過度（固定劑用福爾馬林和多聚甲醛）導(dǎo)致抗體識別抗原位點(diǎn)被修飾：改變抗原修復(fù)方法，縮短與抗原修復(fù)液的孵育時(shí)間。
⑤通透作用破壞膜并除去了膜蛋白：去除緩沖液中的通透劑。
⑥組織沖洗不，有固定劑殘留：所有步驟都要用PBS充分洗滌。
服務(wù)電話021-55130726，如想了解動(dòng)物模型的更多內(nèi)容，歡迎來電咨詢，我們將熱情為您服務(wù)。
