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ELISA 實驗失敗的常見問題

日期：2025-05-01 20:45

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摘要：結合實驗中的實際情況，引起 ELISA 測定結果與文獻報導不一致的原因主要有三點，試劑因素、標本因素和操作因素。一、試劑因素 1. 試劑應選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便的試劑。 2. 不同廠家的試劑不能混用，包括底物和洗滌液。由于校準標準有差異，還有抗體、檢測方法、試劑、交叉反應等因素都會導致對樣本的檢測結果不一致。如：有的廠家酶標板孔間 CV 值大于 20%，標記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定性比較差，使用劣質的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。 3. 要注意試劑...

結合實驗中的實際情況，引起 ELISA實驗測定結果與文獻報導不一致的原因主要有三點，試劑因素、標本因素和操作因素。

一、試劑因素

1. 試劑應選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便的試劑。

2. 不同廠家的試劑不能混用，包括底物和洗滌液。由于校準標準有差異，還有抗體、檢測方法、試劑、交叉反應等因素都會導致對樣本的檢測結果不一致。如：有的廠家酶標板孔間 CV 值大于 20%，標記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定性比較差，使用劣質的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。

3. 要注意試劑的批號和出廠日期，雖然試劑的有效期多為 1 年，建議盡量選擇剛出廠的試劑盒。

4. 避免選擇假的 ELISA 試劑盒。有些廠家為夸大生產(chǎn) ELISA 的指標范圍，用一種指標來冒充其它指標，造成各種種屬、各種指標都可以做的假象。

比如用 TGF beta 這樣的指標代替大多數(shù)試劑盒的其它指標作為檢測抗體，同樣可以獲得良好的標準曲線。因為 TGF beta 在大多數(shù)哺乳動物中（human, mouse, rat, pig, bovine, etc.）都有廣泛表達，種屬間的氨基酸序列同源性達，TGF beta 隨著其他因子的影響，其表達水平也會發(fā)生相應的變化，使得實驗者難以查覺。

在分析完可能出現(xiàn)的因素后，分享以下鑒別方法，大家可以直接去丁香園搜索「如何鑒別真假 ELISA 試劑盒」。

（1）利用干擾實驗可辨別 ELISA 試劑盒是否檢測目的抗原。

（2）如果購買了同一公司的 ELISA 試劑盒 A 和 B，利用交叉實驗可辨別 ELISA 試劑盒真?zhèn)巍?/span>

（3）指標本身也可以鑒定試劑盒的真?zhèn)巍?/span>

二、ELISA實驗標本因素和操作因素

血清是常用的 ELISA 標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致，分為內(nèi)源性物質和外源性物質兩種：

1. 內(nèi)源性物質

有人認為大約 40% 的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導的抗鼠 Ig (s) 抗體、交叉反應物質和其它物質等。

2. 外源性物質

外源性物質常常是由于用于 ELISA實驗 測定的血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被**污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。

三、總結

當 ELISA 測定結果與預期或文獻報導中不一致時，應該考慮試劑因素，這個是做好實驗獲得正確數(shù)據(jù)的前提，其次還有標本因素和操作因素等多方面進行分析，并應采取相應措施排除干擾作用，從而為實驗提供正確可靠的檢測結果。