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成年小鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞原代培養(yǎng)
日期：2025-05-01 21:10
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摘要：上海達為科生物科技有限公司，位于上海長江軟件園，公司目前具備較好的生物學(xué)、醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)平臺，能夠為廣大客戶提供醫(yī)學(xué)科研樣本檢測、合作研究、開發(fā)及生產(chǎn)服務(wù)。?我們擁有專業(yè)的實驗室、先進的實驗設(shè)備和經(jīng)驗豐富的科研技術(shù)人員。技術(shù)團隊包括研究員（博士后）2人，助理研究員（博士）4人，核心研究員（碩士）15人，致力于動物模型、動物實驗、動物實驗外包、整體實驗外包，細胞實驗、細胞實驗外包、整體畢業(yè)課題等等。
1. C57小鼠，8-10周，通過頸椎脫位處死，浸入75%乙醇浸泡5分鐘，轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中。
2. 使用眼科剪和鑷子，使髖關(guān)節(jié)脫臼，保持股骨頭完整。
3. 用止血鉗去除每個股骨頭的軟骨帽，將組織放入含2%雙抗的PBS中。
4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍，將關(guān)節(jié)軟骨小心移到2ml離心管中。
5. 用眼科剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片，加入3ml預(yù)熱的Collagenase D（1.5mg/ml）。
6. 放入37℃、80rpm的搖床中進行**次消化，時間2h 。
7. **次消化結(jié)束后，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，40um的細胞篩過濾后，離心1500rpm，2min。
8. 沉淀用DMEM完全培養(yǎng)基重懸，計數(shù)，種植在24孔板中。
9. 在未消化的組織中加入3ml預(yù)熱的Collagenase D，放入37℃、80rpm的搖床中進行**次消化，時間2h，然后收集細胞。
