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上海達為科生物免疫組化非特異性染色及控制方法
上海達為科生物免疫組化非特異性染色及控制方法
一、非特異性染色的識別
常出現(xiàn)在組織邊緣、膠原纖維及血漿滲出處，壞死組織及固定**的組織中心處。表現(xiàn)為彌漫性，均勻性的背景染色。也可以是隨機分布的陽性反應(yīng)產(chǎn)物點、團或塊狀。
二、非特異性染色的原因
1. Ig與Fc受體結(jié)合
多見于冰凍切片（特別是**造血組織，**細胞，單核細胞，組織細胞表面多），主要是和二抗反應(yīng)，因為一抗一般稀釋度均較大，因此Fc受體的干擾基本不存在。由于福爾馬林固定破壞了大部分的Fc受體，所以石蠟切片不多見。
避免方法：
（1）用以二抗相同種族的正常血清封閉切片；
（2）用不含Fc段的抗體，但價格貴。（V區(qū)，C1區(qū)不含Fc段，用Pepsin消化）
2. 靜電吸附
抗體是一種帶負電荷的球蛋白，容易和帶正電荷的組織相結(jié)合，如膠原纖維。
避免方法：
（1）盡量稀釋一抗；
（2）降低抗體的電荷，如用2.5%NaCl，0.05mTBS代替PBS；
（3）用去垢劑如triton-100，Tween-20等處理切片。
3. 二抗與組織中的Ig結(jié)合
如羊抗兔的二抗，二抗可以標(biāo)本中（人）Ig發(fā)生交叉反應(yīng)，科學(xué)上越接近的動物，交叉反應(yīng)越明顯，如人與猴，兔與豚鼠。
避免方法：用與待測組織相同的5%的正常血清稀釋二抗。如人血清。
4. 組織中殘存醛基與Ig的結(jié)合
如醛類固定后未能的沖洗，殘留醛基可以和Ig結(jié)合。
避免方法：
（1）沖洗
（2）0.02%的新鮮的硼氧化鉀液處理10分鐘后沖洗。
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