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上海達(dá)為科蛋白質(zhì)檢測(cè)
臨床生化檢驗(yàn)中測(cè)定蛋白質(zhì)的方法很多,主要利用蛋白質(zhì)的分子組成,結(jié)構(gòu)或性質(zhì)進(jìn)行。
一、測(cè)定蛋自質(zhì)特征元素-氮 如凱氏定氮法,是測(cè)定蛋自質(zhì)的經(jīng)典方法,1883年kjeldehl創(chuàng),精密度準(zhǔn)確度高,但操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)、技術(shù)性強(qiáng),不合適臨床常規(guī)檢查,一般用于標(biāo)準(zhǔn)血清的標(biāo)定和校正。
二、利用重復(fù)的肽鏈結(jié)構(gòu) 如雙縮脲法,1914年創(chuàng),操作簡(jiǎn)便,重復(fù)性好,各種蛋白產(chǎn)生的顏色反應(yīng)相近,但靈敏度較低,是臨床上測(cè)定總蛋白的常規(guī)方法。
血漿蛋白質(zhì)測(cè)定 三、利用酪氯酸、色氯酸殘基與試劑的反應(yīng)或紫外吸收 如:
1酚試劑法 1921年,F(xiàn)olim創(chuàng),后又經(jīng)改進(jìn),l95l年Lowry改良成今法、靈敏度高(較雙縮脲法高100倍),主要用于微量蛋自質(zhì)檢測(cè),但各種蛋自質(zhì)中酪氯酸含量不一,故準(zhǔn)確性較差,試劑配制復(fù)雜且不穩(wěn)定,化學(xué)干擾奎,臨床上僅用于粘蛋白測(cè)定。
2紫外吸收法 在280nm處有一吸收峰、快速、簡(jiǎn)單,不需加試劑,保留蛋自質(zhì)活性,化學(xué)干擾大。
血漿蛋白質(zhì)測(cè)定 四、利用與染料的結(jié)臺(tái)能力
1考馬克斯亮藍(lán)G-250結(jié)臺(tái)蛋白法(CBB法) 1976年Bradford應(yīng)用于蛋白質(zhì)測(cè)定,操作簡(jiǎn)便、快速、重復(fù)性好,靈敏度高,干擾因素少,但特異性不高,大分子肽(分子量300以上),也參與反應(yīng),線性范圍窄,臨床上主要用于尿、腦溶液蛋自質(zhì)測(cè)定。
2溴甲酚綠結(jié)合清蛋自法(BCG法)靈敏度高,血清用量少,操作簡(jiǎn)便,但特異性不高,部分球蛋白也能與之結(jié)合,是臨床上測(cè)定清蛋白的常規(guī)方法。
五、利用沉淀后借濁度或光折射測(cè)定 如比濁法、折光測(cè)定法,方便簡(jiǎn)便,試劑易得,但濁度的強(qiáng)弱受反應(yīng)的條件影響大(加試劑的方法、溫度等),結(jié)果準(zhǔn)確性差,一般用于尿、腦脊液蛋白測(cè)定。
六、電泳法 CAE、PAGE,臨床上常用電泳技術(shù),但只能計(jì)算各種蛋白質(zhì)百分含量。
七、利用免疫學(xué)特征 免疫化學(xué)法,特異法、靈敏度高,只能用于某種特異蛋白的測(cè)定。
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