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免疫共沉淀的具體注意事項介紹
上海達為科生物科技（上海）有限公司，專業(yè)提供免疫共沉淀技術，以下分享的是免疫共沉淀技術的具體注意事項介紹：
注意的問題：
（1）細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或Triton X-100）。每種細胞的裂解條件是不一樣的，通過經(jīng)驗確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS），細胞裂解液中要加各種酶抑制劑。
（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。
（3）使用對照抗體：
單克隆抗體：正常小鼠的IgG或另一類單抗
兔多克隆抗體：正常兔IgG
在免疫共沉淀實驗中要實驗結果的真實性，應注意以下幾點：
（1）共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發(fā)生。
（2）要抗體的特異性，即在不表達抗原的細胞溶解物中添加抗體后不會引起共沉淀。
（3）確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細胞中，而不是由于細胞的溶解才發(fā)生的，這需要進行蛋白質(zhì)的定位來確定。
原理：
當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x，那么與x在體內(nèi)結合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
優(yōu)點：
（1）相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)；
（2）蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進行的，可以避免人為的影響；
（3）可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復合物。
缺點：
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用；
（2）兩種蛋白質(zhì)的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；
（3）在實驗前預測目的蛋白是什么，以選擇后檢測的抗體，所以，若預測不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
