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基因組DNA提取方法
基因組DNA提取方法
上海基爾頓生物主要致力于基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、生物化學(xué)、病理檢測、基因檢測等技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣。基因組DNA提取方法，一般情況下要求得到的片段的長度不小于100-200kb。在DNA提取過程中好避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以DNA的完整性，為接下來的實驗打下基礎(chǔ)。主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式:玻璃珠法,超聲波法,研磨法,凍融法?；瘜W(xué)方式：異硫氰酸胍法,堿裂解法生物方式:酶法。依據(jù)核酸分離純化方式的不同有:硅質(zhì)材料、陰離子交換樹脂等。
試驗步驟：
1、貼壁細(xì)胞用胰酶消化，離心收集。
2、細(xì)胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次，離心收集。試驗步驟2再重新作一邊。
3、加入5mlDNA提取緩沖液，混勻。
4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達到100ug/ml,混勻，50℃水浴3h,
5、用等體積的酚抽提一次，2500rpm離心收集水相，用等體積的混合物抽提一次，2500r/min離心收集水相
6、用等體積的，異戊醇抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻，冰浴，10min.。
7、2500rpm離心10min.轉(zhuǎn)上清于一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min。2500rpm,離心10min。棄上清。
8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉與2倍體積-20℃預(yù)冷無水乙醇。-20℃20min。
9、12000r/min,室溫離心5min。棄上清。將DNA溶于適量TE中。
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