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小鼠卵巢去勢(shì)致骨質(zhì)疏松癥模型

日期：2025-05-02 02:47
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摘要： 雌**在調(diào)節(jié)骨代謝及維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定性方面有著重要的作用，雌**水平低下被認(rèn)為是導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的主要原因。雌性大鼠雙側(cè)卵巢摘除是一個(gè)較成熟的動(dòng)物模型，可以成功建立模擬雌**缺乏而導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型。這也為研究雌**缺乏對(duì)人體其他系統(tǒng)的損害奠定了基礎(chǔ)。雌**是體內(nèi)重要的**，它對(duì)骨代謝有著重要的作用。在對(duì)小鼠進(jìn)行去勢(shì)手術(shù)后，機(jī)體處于一種低雌**的微環(huán)境，骨轉(zhuǎn)換過程加速，骨代謝加強(qiáng)，成骨細(xì)胞量降低，破骨細(xì)胞活躍，從而導(dǎo)致機(jī)體骨量丟失以及正常生理結(jié)構(gòu)的破換，容易導(dǎo)致骨質(zhì)疏。 實(shí)驗(yàn)...
    雌**在調(diào)節(jié)骨代謝及維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定性方面有著重要的作用，雌**水平低下被認(rèn)為是導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的主要原因。雌性大鼠雙側(cè)卵巢摘除是一個(gè)較成熟的動(dòng)物模型，可以成功建立模擬雌**缺乏而導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型。這也為研究雌**缺乏對(duì)人體其他系統(tǒng)的損害奠定了基礎(chǔ)。雌**是體內(nèi)重要的**，它對(duì)骨代謝有著重要的作用。在對(duì)小鼠進(jìn)行去勢(shì)手術(shù)后，機(jī)體處于一種低雌**的微環(huán)境，骨轉(zhuǎn)換過程加速，骨代謝加強(qiáng)，成骨細(xì)胞量降低，破骨細(xì)胞活躍，從而導(dǎo)致機(jī)體骨量丟失以及正常生理結(jié)構(gòu)的破換，容易導(dǎo)致骨質(zhì)疏。


實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ：SPF級(jí)Balb/c小鼠，健康，雌性未孕，4~6W，體重為18g~20g


實(shí)驗(yàn)分組 ：正常對(duì)照組、模型組、陽**組、受試藥組三個(gè)劑量組，每組15只動(dòng)物。


實(shí)驗(yàn)周期 ：12W


一、建模方法


1. 小鼠3%****鈉40mg/kg腹腔麻醉后仰臥，腹部脫毛。


2. 在無菌條件下于腹股溝水平沿腹中線剪開皮膚及肌層，暴露腹腔。


3. 分離**并摘除卵巢，清理傷口后分兩層縫合皮膚及基層，待小鼠清醒后，將其放回潔凈籠具后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，定期觀察小鼠狀態(tài)及死亡情況并做好記錄。


4. 術(shù)后3天，每只小鼠每天注射4萬單位青霉素，防止感染。


5. 對(duì)照組僅摘除卵巢周圍約1 g脂肪，而保留卵巢，其余處理相同。


6. 12W取材，X線測(cè)量各組小鼠骨密度（bone mineraldensity ，BMD），再腹腔注射麻醉，摘眼球取血，室溫靜止2h，4℃離心機(jī)3000r/min離心10min，分離出上層血清，置-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。取小鼠脛骨?biāo)本用于病理學(xué)檢測(cè)。


二、模型的評(píng)價(jià)


1.卵巢去勢(shì)后小鼠體重、雌二醇及骨密度變化


去勢(shì)組大鼠體重增長迅速，活動(dòng)能力下降，毛色缺乏光澤而略灰暗，而對(duì)照組小鼠體重增加緩慢，毛色光亮，活動(dòng)正常。去勢(shì)組雌二醇水平及股骨 BMD 顯著下降。


2.骨形態(tài)學(xué)染色


取各組小鼠脛骨標(biāo)本，置入 10%中性甲醛緩沖固定液中（pH=7.2-7.4，4°C）固定 24-48h，再經(jīng) 10%EDTA-2 Na 緩沖液（pH=7.4，4°C）脫鈣，隔5-7d 更換脫鈣液；脫鈣后，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，縱向石蠟包埋，5um 連續(xù)切片，常規(guī) HE 染色。


對(duì)照脛骨骨小梁密集，相互交織成網(wǎng)狀；模型組骨小梁數(shù)目明顯減少，骨小梁變薄，呈斷裂狀。


3.細(xì)胞因子的檢測(cè)

有研究發(fā)現(xiàn)，雌**的缺乏將導(dǎo)致機(jī)體自發(fā)的啟動(dòng)應(yīng)激反應(yīng)。去勢(shì)后血清中IL-6 、IL-8 、IL-1β、TNF-α 的表達(dá)量增加，可以用ELISA 法檢測(cè)。



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