常用的有以下幾種。

1 失血性血虛證動(dòng)物模型

本類模型多為急性失血性血虛證,一般采用放血法制備。失血法可有效降低外周血中全血細(xì)胞數(shù)量,但放血量難以控制,模型間有較大差別。一般制備方法:小鼠,體重20～22g,尾部放血0.5ml/只,失血后24h左右即可;大鼠,體重180～200g,尾部放血1.5～2ml/只,隔日1次,連續(xù)5次;犬按40ml/kg體重放血,反復(fù)幾次即可造成失血性血虛證動(dòng)物模型。王平等采用耳靜脈放血法建立了家兔血虛證模型,并從免疫學(xué)、血液流變學(xué)、紅細(xì)胞膜酶、紅細(xì)胞變形性、微量元素等方面對(duì)該模型進(jìn)行了研究。

,多采用放血的同時(shí)結(jié)合其他方法制備血虛證動(dòng)物模型。歐敏等采用放血加適當(dāng)限食方法制備家兔血虛證模型。每次由兔耳中間動(dòng)脈、靜脈及耳緣靜脈放血,放血量為全身血容量的10%,隔日1次,共7次。自造模之日起,家兔改為半量喂養(yǎng)。制成的血虛證家兔外觀體征:精神萎靡、倦臥少動(dòng)、毛枯蓬松、拱背消瘦、唇色淡白、瞼結(jié)膜蒼白、食欲下降、體重減輕、外周血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅蛋白含量顯著降低、超氧化物歧化酶活性顯著降低、過氧化脂質(zhì)含量顯著增加、紅細(xì)胞變形性顯著降低。桂蜀華等采用每日小鼠尾部放血25滴,同時(shí)配合喂養(yǎng)低營(yíng)養(yǎng)精面粉。通過對(duì)血紅蛋白的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),證實(shí)第3周小鼠血紅蛋白顯著降低,停止放血后,繼續(xù)喂精面粉7d,血紅蛋白維持在原有水平不再回升,給予**中藥復(fù)方后小鼠外周血血紅蛋白及紅細(xì)胞量顯著回升。梁毅等采用慢性放血配合饑餓、疲勞法,制作出復(fù)合血虛證小鼠模型。具體方法:①放血。由眼眶后靜脈叢放血6～8滴(約0.5ml),隔日1次,直至模型成功。②控制飲食。自造模之日起改變其正常飲食量,控制在每日50g/kg體重,自由飲水。③勞倦。小鼠每天在溫水池中強(qiáng)迫游泳2次,每次游泳時(shí)間不定,以即將下沉為限,持續(xù)15～20d。一般在造模第15天起顯現(xiàn)血虛證癥狀體征:精神萎靡、毛色枯黃蓬松、眼唇鼻蒼白無華、鼠尾色淡且血管難以辨認(rèn)、體重明顯減輕等。血液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)主要表現(xiàn)為紅細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯下降,白細(xì)胞、血小板則無明顯改變;胸腺指數(shù)下降,骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著增多,體外培養(yǎng)骨髓造血祖細(xì)胞CFU-E、BFU-E和CFU-GM顯著減少。研究表明,中藥復(fù)方對(duì)綜合放血制備的血虛證小鼠模型有良好的**效果。

2 化學(xué)損傷性血虛證動(dòng)物模型

賁長(zhǎng)恩等[9]于1977年采用具有溶血作用的乙酰苯肼(APH)制備血虛證動(dòng)物模型。乙酰苯肼是一種強(qiáng)氧化劑,對(duì)紅細(xì)胞(RBC)有緩慢的進(jìn)行性氧化損傷作用,突出表現(xiàn)在干擾RBC內(nèi)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD),使RBC易于崩解而出現(xiàn)溶血性貧血,使RBC和血紅蛋白(Hb)明顯減少、網(wǎng)織RBC(rRBC)代償性增多,肝脾腫大。由于RBC破壞、減少而引起嚴(yán)重缺氧,導(dǎo)致肌膚、黏膜、毛發(fā)及臟器失養(yǎng),出現(xiàn)中醫(yī)血虛證表現(xiàn)。制備方法:選用Wistar大鼠,皮下注射2%APH生理鹽水溶液,劑量為10ml/kg體重。實(shí)驗(yàn)分一次性給藥和實(shí)驗(yàn)1、4、7天3次給藥兩種,后者第2、3次給藥劑量減半。**中藥可防治和逆轉(zhuǎn)由APH所致血虛證[10]。

另一種常用藥物是環(huán)磷酰胺(CTX)。CTX是細(xì)胞毒制劑,其作用機(jī)制是抑制骨髓功能,使造血細(xì)胞生成減少。此種造模方法簡(jiǎn)單易行,用量及時(shí)間可靈活掌握。但其對(duì)紅細(xì)胞作用不如對(duì)白細(xì)胞明顯,且持續(xù)時(shí)間較短,如果受試藥物顯效較慢,模型動(dòng)物血象即自然恢復(fù),甚至出現(xiàn)反跳現(xiàn)象[11]。小鼠以CTX100mg/kg體重腹腔注射1次,4d后即使外周血白細(xì)胞數(shù)明顯下降。大鼠以CTX灌胃,次60mg/kg體重,1周后改用20mg/kg體重,3～4d1次,共2次;用30mg/kg體重,3～4d1次,共2次;大鼠以CTX靜脈注射,周10mg/kg體重,給藥2次,**周15mg/kg體重,給藥1次,均可形成白細(xì)胞減少模型。

為研究CTX誘發(fā)的小鼠血虛證變化特點(diǎn),馬增春用不同劑量CTX分別進(jìn)行腹腔注射制備小鼠血虛證模型,動(dòng)態(tài)檢測(cè)血虛證小鼠外周血象、CD34+細(xì)胞在骨髓有核細(xì)胞中的比例和骨髓細(xì)胞周期改變。在造血組織中,CD34表達(dá)高的是早期造血祖細(xì)胞,隨著細(xì)胞分化成熟而逐漸減弱直至消失,CD34+造血細(xì)胞包含造血干細(xì)胞和造血祖細(xì)胞[14]。小鼠骨髓中CD34+細(xì)胞的比例可反映骨髓中造血干/祖細(xì)胞的數(shù)量。結(jié)果表明:用CTX分別按100mg/kg、200mg/kg、250mg/kg體重劑量給小鼠一次腹腔注射,均可使外周血白細(xì)胞在注射給藥后3d降至低,且白細(xì)胞降至低點(diǎn)水平與用藥劑量呈負(fù)相關(guān),白細(xì)胞在給藥后5d開始回升,給藥后7d超越用藥前水平,此后緩慢下降。CTX對(duì)外周血血小板有相似影響,但在用藥后5d降至低,10d超越用藥前水平。250mg/kg體重組小鼠骨髓中CD34+細(xì)胞在骨髓有核細(xì)胞中的比例先下降后上升,在第3天達(dá)高峰值,隨后下降;100mg/kg體重組CD34+細(xì)胞在骨髓有核細(xì)胞中的比例先升高,第5天達(dá)高峰值,隨后下降。250mg/kg體重組小鼠給藥后1d,用亞二倍體峰檢測(cè)骨髓凋亡細(xì)胞率為6.53%±2.66%,用DNA凝膠電泳可檢測(cè)到DNA梯狀帶,兩項(xiàng)指標(biāo)均表明CTX在用藥后1d可誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞凋亡。250mg/kg體重組小鼠骨髓中G2/M期細(xì)胞在給藥后第3天達(dá)到高峰,S期細(xì)胞在給藥后第5天達(dá)到高峰;100mg/kg體重組小鼠骨髓細(xì)胞周期有相似規(guī)律,但G2/M期和S期細(xì)胞的達(dá)峰時(shí)間延遲。CTX可以動(dòng)員骨髓造血干祖細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期而增殖,增加了骨髓造血干祖細(xì)胞的數(shù)量,但此過程加速了干祖細(xì)胞池的耗竭,從而對(duì)骨髓造成更大損傷,這可能是CTX誘發(fā)小鼠血虛證的機(jī)制之一。**方劑可顯著促進(jìn)該血虛證模型小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)量的恢復(fù),提高骨髓中CD34+細(xì)胞的比例,并促進(jìn)骨髓細(xì)胞由G0或G1期進(jìn)入S期。蒲春霞等給小鼠腹腔注射CTX100mg/kg體重,每日1次,連續(xù)3d,制備血虛證模型。結(jié)果顯示,模型小鼠外周血白細(xì)胞和血小板顯著降低,脾結(jié)節(jié)生成單位和粒系-巨噬系集落生成單位顯著降低。而**方劑可顯著逆轉(zhuǎn)上述變化。譚洪玲等采用腹腔注射CTX250mg/kg體重,造模后第10天進(jìn)行骨髓集落細(xì)胞培養(yǎng),同時(shí)檢測(cè)CD34+細(xì)胞。結(jié)果表明:模型對(duì)照組小鼠骨髓中的CFU-GM、CFU-E、BFU-E、D34+細(xì)胞比例顯著減少。**方劑可顯著逆轉(zhuǎn)上述改變。

,化學(xué)損傷模型還采用APH與CTX聯(lián)合使用的復(fù)合血虛證模型。此種造模方法從雙重環(huán)節(jié)上造成動(dòng)物血虛,表現(xiàn)為骨髓超微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,造血微環(huán)境遭到破壞,骨髓造血重建活性下降,骨髓有核細(xì)胞數(shù)量及其增殖速度下降,從而導(dǎo)致各類細(xì)胞數(shù)量下降。采用此方法造模,模型動(dòng)物存活率較高,血虛狀態(tài)的持續(xù)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。金若敏等采用該方法造模:小鼠分別于1天、第4天皮下注射APH20mg/kg、40mg/kg體重,從第4天起,每日腹腔注射CTX40mg/kg體重,連續(xù)4d。模型小鼠在注射后第4天即出現(xiàn)行動(dòng)遲緩,團(tuán)縮拱背,喘促,面、眼、耳、尾蒼白而涼,毛蓬豎而少光澤,血色暗紅。小鼠體溫顯著降低,游泳時(shí)間縮短。于末次給藥1.5h后觀察小鼠各項(xiàng)指標(biāo),結(jié)果顯示,模型小鼠外周血紅細(xì)胞、白細(xì)胞數(shù)量顯著減少,網(wǎng)織紅細(xì)胞比例顯著升高,骨髓有核細(xì)胞數(shù)顯著減少,血漿cAMP/cGMP比值降低。**中藥能減輕骨髓細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的損傷,顯著增加血虛證模型小鼠紅細(xì)胞、白細(xì)胞數(shù),降低網(wǎng)織紅細(xì)胞在外周血紅細(xì)胞中過高的比例。王燕平等用此方法造模觀察到模型小鼠的免疫功能低下,主要表現(xiàn)為T**細(xì)胞增殖能力下降。而中藥可使其回升。袁久榮等于造模1天和第4天分別給予小鼠CTX60mg/kg體重,第4天和第7天分別給予APH0.1mg/kg體重制備血虛證模型,造模后第5天,小鼠出現(xiàn)懶動(dòng)、豎毛、少食、體重下降、尾色蒼白晦暗等現(xiàn)象。造模后第11天模型小鼠外周血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白量、白細(xì)胞數(shù)等均顯著降低。給予**中**劑的小鼠各項(xiàng)指標(biāo)均顯著高于模型小鼠。