近年來，隨著人們生活水平的提高以及飲食習慣的改變，糖尿病(diabetes mellitus,DM)的發(fā)病率也逐年升高。隨著人口的增長，糖尿病患者的增多以及病程的進展，糖尿病腎病(diabetes neuropathy,DN)發(fā)生率也隨之增加并呈年輕化趨勢[1]。糖尿病腎病不僅可以增加心腦血管的發(fā)生率，也是導致糖尿病患者致死、致殘的重要原因之一[2]，其每年給患者及家屬、社會、都帶來很大的負擔。因此，如何預(yù)防和**糖尿病及其并發(fā)癥就為人們所關(guān)注。關(guān)于糖尿病腎病的發(fā)病機制并不清楚，其是由多因素共同作用的復雜的疾病，因而研究其發(fā)病機理成為近年來的研究熱點。而發(fā)病機理的研究多是從動物模型為基礎(chǔ)，所以研究糖尿病及糖尿病腎病的動物模型具有很重要的意義。因此我們應(yīng)用高脂高能量飼料加單次腹腔小劑量鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)來誘導動物，探討是否可以成功建立糖尿病腎病的動物模型，以備后續(xù)實驗的進行。
1 實驗材料
1.1 實驗動物:SPF級雄性Wistar大鼠26只，體重約220-250g左右及其普通飼料和高脂高能量飼料，均由廣西醫(yī)科大學動物實驗中心提供，高脂高能量飼料配方熱比為碳水化合物25%、蛋白質(zhì)28%、脂肪45%，普通飼料配方熱比：碳水化合物56%、蛋白質(zhì)22%、脂肪10%，其它為維生素、微量元素等。動物自由攝食飲水。動物飼育環(huán)境按GB14925-2001要求，相對濕度為40%-70%，室內(nèi)溫度為20℃-22℃[3,4]。
1.2 材料:微量血糖測定儀及血糖試紙（羅氏公司），檸檬酸緩沖液，蛋白酶抑制劑混合片，其它試劑為國產(chǎn)純。
2 實驗方法
2.1 大鼠適應(yīng)性地飼養(yǎng)一周后，隨機選取20只給予高脂高能量飼料喂養(yǎng)，另取6只繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)，為正常對照組。
2.2 8周后，高脂高能量飼養(yǎng)的大鼠給予小劑量鏈脲佐菌素(STZ，Sigma公司)按劑量25mg/kg單次腹腔注射（將STZ溶于0.1 mol／L檸檬酸緩沖液中，pH 45,大鼠注射STZ前禁食12h）來誘導動物建立糖尿病動物模型，普通飼料飼養(yǎng)的大鼠予以注射等量的檸檬酸緩沖液,大鼠繼續(xù)原條件飼養(yǎng)。
2.3 3天后取尾靜脈血測末梢血血糖，把血糖≥16.7mmol/L視為高血糖大鼠，高血糖大鼠繼續(xù)予以高脂高能量飼料，此后每3天檢測1次血糖，當血糖穩(wěn)定≥16.7mmol/L者看做糖尿病大鼠，視作建模成功，為糖尿病組，正常對照組繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)。
2.4 用金屬代謝籠收集糖尿病大鼠的尿液，連續(xù)收集3天，每次收集6小時尿后，立即10000g，4℃離心10min，除沉淀，按照試劑盒推薦比例（1片藥配10ml液體）放入蛋白酶抑制劑混合片，-80℃超低溫冰箱保存并檢測尿液中尿白蛋白/尿肌酐的比值，收集期間禁食不禁水。間隔4周重復檢測，連續(xù)3次檢測尿白蛋白/尿肌酐（Alb/Cr）均達到30-300mg/g，診斷為早期腎病，并分入早期糖尿病腎病組。
3 實驗結(jié)果
3.1 建立糖尿病模型:注射鏈脲佐菌素4周后，20只大鼠中有11只大鼠血糖穩(wěn)定≥16.7mmol/L，成功建立糖尿病大鼠動物模型11只，成模率為55%。
3.2 建立糖尿病腎病模型:糖尿病大鼠繼續(xù)予以飼養(yǎng)高脂高能量飼料，并按上述方法檢測尿白蛋白/尿肌酐比值，至第28周時糖尿病組有7只大鼠連續(xù)3天尿液中尿白蛋白/尿肌酐的比值均達到30-300mg/g，成功建立糖尿病腎病動物模型7只，為糖尿病腎病組，成模率為63%。
4 討論
，國內(nèi)外已知的建立糖尿病動物模型的方法有很多種，如實驗性糖尿病動物模型(experimental diabetes animal model）、自發(fā)性糖尿病動物模型(spontaneous diabeles animal model）、轉(zhuǎn)基因糖尿病動物模型(transgenic diabetes animal model）[5]。其中實驗性糖尿病動物模型的建立有胰腺切除法、化學藥物特異性破壞胰島 細胞、手術(shù)及藥物聯(lián)合制作糖尿病模型、病毒誘導方法。其中胰腺切除法雖然是早的糖尿病動物模型復制方法，但因其操作繁雜，而且一般用于較大的實驗動物，所以使用受到限制，故用化學藥物誘導制作糖尿病動物模型就成為很普遍的方法，現(xiàn)在運用也比較廣泛。其中化學藥物中常使用的是鏈脲佐菌素（STZ），因其誘導糖尿病模型成模率高、對機體組織毒性作用小、用量少、動物存活率高，成為國內(nèi)外使用較多的制備糖尿病動物模型的藥物。STZ通過自由基的作用有選擇性地破壞了動物的胰島B細胞，使B細胞功能受損，胰島素合成分泌減少，引發(fā)糖尿病。高糖高脂喂養(yǎng)1～2個月的大鼠，再加小劑量一次腹腔注射STZ即可建立具有外周胰島素抵抗和胰島功能輕度受損的糖尿病動物模型，與人2型糖尿病的發(fā)生、發(fā)展過程相似，且STZ用量小，減少了對其他組織如肝、腎的損害。國外有學者報道選用雄性大鼠制造模型的成模率明顯高于雌性大鼠，所以在本實驗中我們使用STZ誘導Wistar雄性大鼠建立糖尿病腎病大鼠模型[6,7]。

本實驗采用高糖高脂高能量飼料喂養(yǎng)后加單次腹腔注射小劑量STZ(25mg／Kg)誘導糖尿病大鼠模型，3天后取尾靜脈血測血糖，連續(xù)監(jiān)測血糖均≥16.7mmol/L認為糖尿病大鼠建模成功。隨著病程的進展，尿白蛋白/尿肌酐比值升高，提示腎臟的腎小球濾過功能受損，腎功能下降，說明本實驗?zāi)Ｐ痛笫蠓咸悄虿∧I病特征。在本實驗中，糖尿病腎病大鼠還有4只動物模型未建立，說明大鼠之間的個體差異也較大。腎小球濾過功能障礙主要是由腎小球基底膜通透性增加或者腎小管重吸收障礙有關(guān)。腎小球基底膜通透性增加主要由濾過間隙增大及電荷屏障功能障礙引起，導致尿中大量蛋白流失。尿蛋白主要成分是白蛋白，亦可包括其它血漿蛋白成分，與尿蛋白的選擇性有關(guān)。腎小管上皮細胞重吸收和再分泌對蛋白尿的形成也有的影響。尿蛋白的量還受血漿蛋白濃度及腎小球濾過率等因素的影響，如血漿蛋白濃度嚴重降低時，尿蛋白排出量減少，反之，靜脈輸注蛋白制劑時，尿蛋白排出量可一過性增加，此外藥物如非固醇類**藥、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑及受體阻滯劑，通過影響腎小球灌注、跨膜壓等可使尿蛋白量發(fā)生改變。尿白蛋白/尿肌酐比值是測定糖尿病腎病腎功能的一個新的指標，有報道指出其對診斷早期糖尿病腎病有的作用，因其留取尿液方便、可以排除血漿蛋白濃度以及尿量的影響，所以是近年來用于監(jiān)測尿蛋白排出情況的一種新的可靠方法，能夠可靠地反映24h尿蛋白量。故本實驗采用尿白蛋白/尿肌酐來測量尿蛋白的排出情況。
關(guān)于糖尿病及糖尿病腎病的基礎(chǔ)研究多是通過動物模型進行的，成功建立動物模型是關(guān)鍵，本文僅做了小小的探討，在以后的實驗中還可以進行更加深入的研究。