1.腦梗塞動物模型制作方法有以下幾種。

1.1 光化學(xué)法 

腹腔內(nèi)麻醉后，消毒并縱向切開頭皮，暴露右側(cè)顱骨，小心分離骨膜以免損傷顱骨表面影響其透光性。顱骨表面覆以中間帶圓孔的避光紙，其下為感覺運動皮質(zhì)中樞。從股靜脈緩慢注入2%玫瑰紅B后，將大鼠固定于立體定位儀上，冷光源探頭貼近暴露的顱骨。此法優(yōu)點在于皮層梗塞區(qū)部位可以選擇，并不局限在大腦中動脈區(qū)；皮層損害大小一致，且能通過控制照射時間、強度、范圍和光敏染料用量，制成不同大小和深度的梗塞模型。大缺點在于，無法復(fù)制再灌注損傷模型，且由于是性閉塞照射的動脈，妨礙擴血管藥物的**觀察。

1.2 開顱法 

經(jīng)典方法是分離并電凝橫過嗅束外緣或內(nèi)緣處的大腦中動脈（MCA）造成腦梗塞和絲線結(jié)扎大腦中動脈造成腦梗塞，這是公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)開顱法（MCAO大腦中動脈梗塞）模型。采用電凝法阻斷大腦中動脈，阻斷血流，閉塞了大腦中動脈所有的可見分支，梗塞的效果更好。開顱法造成腦梗塞的模型一般就是開顱直接阻斷大腦中動脈，可以說相當(dāng)于性梗塞性人類卒中，其缺點在于：需要開顱，造成的創(chuàng)傷大，不易控制出血、感染等因素，影響血流變等的指標(biāo)測定；模型造成后梗塞，無法觀察到再灌注損傷效應(yīng)。

1.3 線栓法（插線法）

該法是分離暴露頸部血管，從頸外動脈（ECA）或頸總動脈（CCA）分叉處插入外科4-0尼龍線，進入頸內(nèi)動脈（ICA），阻斷大腦中動脈起始端及其所有側(cè)支血液供應(yīng)，導(dǎo)致大腦中動脈局灶性缺血，時間后輕提插線，有阻力時提示絲線頭端已達(dá)頸外動脈或頸總動脈切口處，即制成再灌注損傷模型，無需再次切開頸部。缺點：動物體質(zhì)量要求嚴(yán)格，一般定為280~350g。

1.4 栓塞法  

栓塞法即直接將外部栓子，如血凝塊或其他栓子注入血管，阻塞大腦中動脈，使出現(xiàn)大腦中動脈梗塞。本法造模優(yōu)點在于：血凝塊栓子栓塞腦血管，與臨床上腦梗塞病理過程為接近，且不用開顱，只是由于栓子的隨機性，無法預(yù)測梗塞的部位和大小成為其主要的缺點。

綜合上述，我們得知的腦梗塞模型有著各自的優(yōu)點和缺點，現(xiàn)在我們來探討一種改良的栓塞模型，一種與人群中常見腦梗塞存在差異較小的模型。

2 實驗動物的選擇

2.1 種類 

，用于腦梗塞實驗的動物有：大鼠、兔、狗、猴等。從進化角度來看，靈長類與人近似，如猴、長臂猿、猩猩、狒狒等，但此類動物數(shù)量比較少，價格昂貴；兔和狗因其腦部解剖和血管供應(yīng)與人體有較大差異，價格也較為昂貴，因而也較少用；大鼠雖然從整體上與人類并不十分相似，但某些方面卻與人類非常近似，如其自發(fā)性高血壓的變化與人類相似，并伴有高血壓性心血管病變，如腦血栓、梗塞、出血等癥狀，是研究腦血管病的佳動物；而且前人對大鼠的實驗研究較多、較早，積累了大量的資料和方法可以參考借鑒，品系多，成本少，易于進行微生物方面的控制，大鼠可達(dá)到清潔級，SPF（無特定病原體動物）級及無菌級的試驗。所以多選擇用大鼠作為實驗對象。

2.2 體重 

動物體重要適當(dāng)，有研究發(fā)現(xiàn)，體重越小，死亡率越高。180g以下的大鼠死亡率可達(dá)70%，而350g以上的大鼠死亡率則在10%以下，但是體重過大的大鼠由于血管變粗，模型成功率不高。故而應(yīng)選擇體重在250~300g的大鼠，模型成功率較理想（80%）。

2.3 年齡 

大鼠腦部供血接近于人體，老年大鼠與老年人有相似的脈管系統(tǒng)退行性改變，如內(nèi)皮變薄，血管基底層增厚，動脈硬化的血管壁膠原蛋白增加；腦內(nèi)興奮性氨基酸與抑制性氨基酸平衡失調(diào)，線粒體數(shù)目減少及呼吸功能損害，血腦屏障破壞及免疫反應(yīng)低下，對缺血缺氧的反應(yīng)力差，易發(fā)生腦梗塞。相同實驗條件下，缺血老年鼠較青年鼠神經(jīng)細(xì)胞損害重，梗塞面積大。同等缺血損傷，老年鼠的精神狀態(tài)改變、血腦屏障破壞、梗塞面積、神經(jīng)細(xì)胞損害及炎性細(xì)胞浸潤等均較青年鼠重；而膠質(zhì)細(xì)胞和微血管增生等修復(fù)反應(yīng)較青年鼠輕?；苏J(rèn)為模型制作應(yīng)以老年大鼠[其標(biāo)志是在50%的存活率時。Sprague-Dawley（SD）大鼠為14個月，Wistar大鼠24~30個月，以后者為好。

3 動物模型處理

臨床上腦血栓患者多伴有高血壓等合并癥，在實驗中我們直接通過給大鼠皮下注射大劑量腎上腺素，使血管收縮，外周阻力增加，血壓升高，同時促進糖原及脂肪分解，使血糖升高，血中游離脂肪酸、乳酸增加，機體代謝增強，組織耗氧量顯著增加等效應(yīng)來模擬暴怒時機體的狀態(tài)，從而使得老鼠處于高血壓狀態(tài)，引發(fā)模型大鼠的血液流變學(xué)各客觀指標(biāo)的異常改變，造成血瘀模型。血壓測量用無創(chuàng)大鼠尾部測血壓。

4 栓子的制作

制作血栓性腦栓塞動物模型，栓子的成分十分重要。所用栓子大多為異體栓子，如明膠海綿、硅膠、人或其它動物的全血血凝塊等，還有部分栓子雖是自體的，但大多是動物自體全血凝固后形成的“紅色血栓”，實為凝血塊，其主要成分為紅細(xì)胞、血小板，纖維蛋白含量較少，松軟易碎，在體內(nèi)易自溶，栓塞血管可自然再通。因此所用栓子可采用如下方法：麻醉，大鼠股靜脈穿刺抽血，全血離心，離心結(jié)束后出現(xiàn)分層現(xiàn)象，取兩層的交界處乳白色薄層（即白細(xì)胞和血小板層），迅速加入凝血酶，凝固后置于生理鹽水中反復(fù)漂洗，取出稱重，放入試管，加入生理鹽水，然后將試管放入冰水燒杯（以防止高溫變性）用超聲波細(xì)胞粉碎機將其打碎，加入生理鹽水配成栓子混懸液。制作栓子過程中盡量無菌。本栓子是由含血小板的健康動物血漿凝固而成的“白色血栓”，柔軟且有韌性，不易自溶，而且容易制成微小栓子。

5 腦栓塞的形成

參考大鼠腦栓塞動物模型的制造方法，手術(shù)將栓子注射到動物頸動脈中。

6 評價指標(biāo)

國內(nèi)的腦梗塞動物模型的評價指標(biāo)有兩個方面：一是病理形態(tài)學(xué)觀察；二是神經(jīng)功能分級評價和學(xué)習(xí)記憶行為功能測定。

6.1 病理形態(tài)學(xué)觀察 

主要是腦梗塞灶的染色切片觀察，直觀地觀察動物模型的腦梗塞情況。此外還有對腦組織含水量測定，腦梗塞的體積測定等。

6.2 神經(jīng)功能分級評價 

主要是采用5級評分法或4級評價法。學(xué)習(xí)記憶功能測定是反映腦梗塞模型動物的認(rèn)知記憶能力的測定，腦梗塞通常都會導(dǎo)致大腦認(rèn)知功能的缺損，表現(xiàn)為學(xué)習(xí)、記憶力的減退，因此此類測定具有的價值。主要使用的方法有迷宮實驗、跳板實驗，常用的是水迷宮實驗。

6.3 腦梗塞率及穩(wěn)定性的評定 

大鼠在術(shù)后24h冰上斷頭取腦，-20℃冷凍約15min。待其稍變硬時，用刀片將腦切成厚2mm的冠狀切片。浸于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的TTC磷酸鹽緩沖液中（pH=7.4），恒溫浴槽中37℃避光孵育約15min，翻面繼續(xù)染15min。正常腦組織染為深紅色，腦梗塞區(qū)不染色（蒼白色）。通過重量法測量腦的梗塞率，即：先稱取全腦的重量Tm，隨后仔細(xì)分離腦組織中梗塞部分并稱重Pm，梗塞率（%）=（Pm /Tm）×，并計算出相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

若模型動物神經(jīng)功能評價按照5級評分法[4]的評分標(biāo)準(zhǔn)：0分：無神經(jīng)功能缺損癥狀；1分：輕微神經(jīng)功能缺損，不能伸展左側(cè)前爪；2分：中度局灶性神經(jīng)功能缺損，向左側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分：重度局灶性神經(jīng)功能缺損，向左側(cè)傾倒；4分：不能自發(fā)行走，意識水平下降。符合2、3、4分，學(xué)習(xí)記憶能力測定——水迷宮法。測定并且與正常動物明顯存在差異，腦部病理學(xué)切片顯示梗塞區(qū)明顯，則可證明模型造模成功。

7 小 結(jié)

選擇老年大鼠作為實驗對象，對其進行長時間注射腎上腺素，使得它處于高血壓狀態(tài)，并使用由含血小板的自體血漿凝固而成的“白色血栓”，注入老鼠頸動脈，建立復(fù)合模型?；谒ㄗ拥碾S機性，無法預(yù)測梗塞的部位和大小是我們這一模型主要的缺點。但正是因為栓子的隨機性符合臨床上腦梗塞彌散的特點，接近于臨床腦梗塞病人的實際發(fā)病情況，能夠較準(zhǔn)確的反應(yīng)其病變機理，并且我們的復(fù)合造模能在后續(xù)的藥物**中發(fā)揮的作用，故此模型可作為研究腦梗塞的較為理想的模型。